-------從2年來微生物實驗室偏差說開來
自從本人接管微生物實驗室以來,發生過大大小小的實驗室偏差,現在就各類偏差現象談談個人看法:
由於微生物的特殊性,微生物檢測異常結果的調查與評價較理化檢測更為復雜和困難,因為
1樣品在環境中的均壹性較差(即 分布不均)
2微生物的不穩定性--因為藥品檢驗的對象是具有繁殖能力的活細胞生物,其能因存放時間的延長而死亡亦或大量繁殖
3檢驗周期長--需待其形成肉眼可見的菌落,壹般需72小時
4檢驗過程中影響因素較多,如微生物的生理狀態,樣品的抑菌性,培養基靈敏度,培養溫度
所以,盡管我們執行檢驗規程和sop,在實際操作中也難免會有實驗室偏差,因此微生物實驗室有必要制定適當的偏差處理方法,
個人認為:對於微生物實驗室偏差,檢驗員應端正心態,以科學嚴謹的態度去面對,切勿隱瞞(特別是超標偏差), 當出現偏差,當事檢驗員應有清晰的分析思路:從壹切可能的角度去調查,從而有針對性的去處理偏差,得出正確的實驗結果..實驗室負責人應在接到異常或超標結果的報告後,及時向部門經理匯報情況,
然後按以下步驟進行調查分析偏差原因並作出適當處理,
1檢查所有的 玻璃儀器,工具,溶液,樣品是否正確
微生物限度檢驗所用玻璃儀器,稀釋劑:極少會出現染菌現象, 因為其滅菌規程成熟且簡便,壹般可對其進行徹底滅菌,若還是出現問題,則可能是設備性能不達標或保存過程中受到汙染了.
另:如研缽等能用幹熱滅菌的器皿則盡量用幹熱法滅菌,因為濕熱法滅菌後的物品會因帶有水蒸氣--冷凝而成少量水附著於物品表面和內壁,若不及時將其烘幹,則易滋生微生物造成不必要的汙染,
2與檢驗員討論檢驗方法,確認無方法和操作方面的問題
微生物限度檢查中制備供試液所用到的乳化劑,分散劑有聚山梨酯80,十四烷酸異丙脂,其能將壹些非水溶性的供試品(硬脂酸鎂)在稀釋劑裏充分混勻,達到"供試液均勻壹致"的效果,使被檢樣品更具代表性,為了便於觀察某些細菌,在細菌檢查培養基中還可加入壹顯色劑,如TTC,其最終濃度為0.001%,若過高則會對細菌的生長有抑制作用
在檢查抗菌藥物時,可以在供試液制備過程中(或在培養基裏)加入中和劑,其用量應在方法驗證過程中確定.
例1:在檢查青黴素類藥物如 阿莫西林膠囊時,則可在稀釋劑或培養基中加入青黴素酶,其能完全特異,迅速的使青黴素滅活,,從而使青黴素失去抑菌,殺菌的作用.
例2:在檢查喹諾**類抗菌藥時,可根據其理化性質:3,4位羧基與**羰基,容易和金屬離子如,鈣,鎂,鐵,鋅等形成螯合物降低藥物的活性.在稀釋劑或培養基中加入MnSO4(0.1mol/L)
3檢查在相關時間段其他樣品或同類樣品的檢測結果 和 微生物菌落形態
也可參考當天/當次檢驗其他檢品的檢驗結果,有類似異常情況發生,可根據所檢查微生物菌落形態作出相應的判斷.微生物在液體培養基(如營養肉湯,改良馬丁培養基)中的培養特征會有:形成菌膜/形成沈澱/渾濁,在固體培養基(營養瓊脂,玫瑰紅鈉瓊脂)上的形態有:菌落表面形態—圓形,根狀,不規則形,菌落隆起形狀—隆起,扁平,凸起,臍狀凸起,菌落邊緣形狀—邊緣整齊,裂葉狀,波狀,絲狀,鋸齒狀,
舉例:金黃色葡萄球菌,在營養瓊脂平板上,經37度培養24-48小時後,產生金黃色脂溶性色素,呈金黃色,菌落較小,,直徑多在0.8-1.5mm之間,圓形,凸起,邊緣整齊,表面光滑,濕潤,不透明之菌落.