1材料和方法
1.1試劑維生素C、鄰菲羅啉、硫酸亞鐵銨、過氧化氫、磷酸二氫、無水乙醇、氫氧化鈉。
1.2儀器752N紫外可見分光光度計，DK-600S三用恒溫水浴箱。1.3方法以維生素C為自由基清除劑，用鄰菲羅啉-Fe2+氧化法檢測H2O2/Fe2+體系中Fenton反應產生的·OH。H2O2/Fe2+體系產生的OH將鄰菲羅啉-Fe2+氧化為鄰菲羅啉-Fe3+，削弱了鄰菲羅啉-Fe2+在536 nm的最大吸收，顯著降低A536。當反應體系中存在OH清除劑時，氧化過程受到抑制，但A536沒有明顯降低，OH清除劑的清除能力可以用A536值來比較[5]。實驗從三個方面進行了改進:壹是將反應環境由pH 7.4改為pH 4.5二是將37℃保溫時間由60 min改為30min；；第三，吸光度的波長從536 nm變為510 nm。實驗中，對照實驗分別在pH 7.4的磷酸鹽緩沖液和pH 4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖液中進行。在5 ~ 60 min的時間範圍內，分別在536 nm和510 nm處測量吸光度，比較兩種pH條件下吸光度的差異。反應中，依次加入鄰菲羅啉、緩沖溶液、自由基清除劑維生素C、Fe2+和H2O2作為配料管；沒有維生素c作為氧化管；不添加維生素C和H2O2作為對照管。
1.4統計處理組間采用t檢驗，數據以s表示。
2個結果
2.1不同測定波長和不同pH環境的比較從表1可以看出，鄰菲羅啉-Fe2+絡合物的最大吸收波長為510 nm，最適酸堿環境為pH 4.5。表1不同測量波長和不同pH環境的比較(略)
2.2不同保持時間與pH環境對比圖1顯示pH 7.4時不同保持時間對A510的影響，對照管吸光度在15 min達到峰值，之後緩慢下降；然而，加藥管和氧化管的吸光度從壹開始就呈現急劇下降的趨勢。圖2顯示了在pH 4.5時不同保持時間對A510的影響。對照管的吸光度在30 min時達到峰值，之後基本穩定。30 min後，加藥管和氧化管的吸光度明顯下降。
2.3管間吸光度變化值(δA)的比較從表2可以看出，隨著保溫時間的延長，管間δA逐漸增大，但在pH 4.5時，30 min時δA加藥管-氧化管最大，之後較為穩定。表2試管間吸光度變化值(δ A)的比較(略)
3討論
實驗結果表明，鄰菲羅啉-Fe2+配合物在酸性條件下(pH 4.5)相對穩定，具有較高的吸光度，最大吸收波長為510nm。保溫時間也是實驗中的壹個重要環節。保持壹定時間時，各管吸光度大，管間吸光度變化值(δ A)也大，有利於自由基清除劑的選擇。從實驗中觀察到，當對照管保持pH 4.5 30min時，有壹個最大吸收峰，加藥管也有較大的吸光度，使得加藥管和氧化管之間的δ A (δ A加藥管-氧化管)達到最大。該值能更好地說明自由基清除劑的作用，是判斷自由基清除劑的重要指標，也能反映該方法的靈敏度。然而，在pH 7.4時，加藥管和氧化管在開始時顯示出急劇下降。雖然兩管吸光度不同，但δ A加藥管-氧化管比pH 4.5時小很多，沒有說服力，降低了反應的靈敏度。綜上所述，用鄰菲羅啉-Fe2+氧化法測定自由基清除劑的效果時，最佳反應條件為pH 4.5，檢測波長510 nm，37℃保溫30 min。