壹、實驗步驟和控制措施
1.標本采集、接種和培養:
對患者采血部位進行常規消毒，用5mL壹次性無菌註射器或采血針采集血液約3mL，註射5mL無菌肝素鋰抗凝管，倒置混勻。加強門診和住院部標本采集人員的培訓。標本必須無菌采集，以避免溶血和凝血。
在生物安全櫃中，用壹次性無菌註射器(2.5mL)抽取抗凝劑，接種於培養瓶(含5mL人外周血淋巴細胞培養液)，每瓶0.4mL，至少接種兩瓶。接種後，輕輕水平搖動幾次，混勻。在37±0.5℃的兩個培養箱中直立66 ~ 72小時，第二天觀察培養液有無凝固、溶血或細菌生長。所有用於細胞培養和細胞學處理的培養液和試劑必須經過預先檢驗，新的壹批試劑到貨後必須進行批間驗證。
2.細胞收獲和生產:
培養結束前，在生物安全櫃中的培養基中加入秋水仙堿，秋水仙堿的終濃度為0.1~0.5μg/mL，輕輕搖勻，置於37±0.5℃的培養箱中處理1.5h，秋水仙堿處理後，小心地從培養箱中取出培養瓶，用吸管將培養物吸入離心管中，離心:1500r/m×65438+棄去上清液，加入8 ~ 10ml 37℃孵育的0.075mol/L KCl低滲溶液，用吸管吹成細胞懸液，置於37℃水浴中25分鐘。在每個離心管中加入1.5mL卡諾固定液(甲醇:乙酸3:1)，輕輕吸吹，室溫靜置10min。離心機:1500轉/米×10分鐘，棄去上清液。然後在離心管中加入8mL卡諾固定液，立即用吸管吹成單細胞懸液，室溫放置30min，離心:1500r/m×10min，棄去上清液，如此反復3次。秋水仙堿處理時間過長，有許多分裂細胞和短染色體；反之，則少而細長。這兩種情況都不適合觀察形態和計數，要準確把握秋水仙堿的濃度和時間。低滲使紅細胞膜破裂，淋巴細胞腫脹，低滲治療的濃度和時間要適當。但混合細胞固定後壹定要輕，否則會造成細胞破裂和染色體丟失。
將0.2~0.5 mL新鮮固定液滴入離心管中，用吸管將淋巴細胞團輕輕吹成細胞懸液，從冰箱中取出冰片，每片加入2~3滴懸液，75℃烘烤2 ~ 3小時。載玻片壹定要冰浴清洗，否則染色體分散不好。在制作過程中，如發現細胞不腫脹，細胞膜不破裂，染色體成簇，無法拉伸，可延長固定時間數小時或適當增加冰醋酸比例。
3.捆紮和染色
將50毫升pH值為7.4的1/15M磷酸鹽緩沖液倒入立式染缸中，加入0.5毫升2.5%胰蛋白酶溶液，混勻。胰酶消化後，用10%吉姆薩染液染色3min，然後用鑷子取出載玻片，用自來水輕輕沖洗兩面，再用電吹風吹幹。每次膠帶顯影都要做實驗前處理，以確定正確的膠帶顯影時間，不能盲目處理所有載玻片。判斷顯帶效果，要多觀察長度適中的分裂相，不能僅憑1和2分裂相的顯帶效果來決定下壹次顯帶時間。
二，培訓失敗的原因分析
就2015而言，到目前為止，有1500份標本，10份標本培養生產後不能用於染色體分析。外周血染色體的制備是壹個手工項目，過程復雜，每個環節都要嚴格控制。這個房間的工作人員都經過嚴格的培訓，考試合格後才能上崗。這些10不合格標本的原因已全部排除為操作人員失誤所致。實驗室的設施和環境都符合實驗要求。所以我們對這6位患者進行了電話回訪，發現* * *的壹個共同特點就是使用了消炎藥，尤其是兒科住院患者。
抗生素可能抑制淋巴細胞轉化，影響培養質量。對於這部分患者，我們建議停藥後至少兩周再次抽血。有4例患者采血培養後淋巴細胞計數增高，可用於染色體分析，均有報道。1患者再次采血後仍無有效分裂相，電話告知仍在服用中藥消炎藥。仍有5名患者尚未復查。
三。糾正和預防措施
對於外周血染色體制備失敗的情況，我們先排除人為誤差和實驗室設施環境的影響，再考慮是否是同等條件下病例本身的原因。因此采取的糾正措施是:告知患者標本培養不合格，原因可能與使用消炎藥有關。建議停藥至少兩周再抽血。
目前我們實驗室在采集標本前總是會詢問患者的病史，所以可以通過詢問是否使用消炎藥來防止培養失敗率。我告訴過妳染色體檢查不是急件，可以停藥後再檢查。
總之，要想制備好染色體標本進行核型分析，細胞培養、制作、顯帶的每壹步都不可忽視。需要在操作過程中不斷總結經驗，才能提高外周血染色體標本制備的成功率。
遺傳組楊莉/文
急性淋巴細胞白血病檢測項目總結
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