抗氧化劑評價方法ORAC
ORAC是氧化自由基吸收能力的縮寫,是測試抗氧化能力的評價方法體系。
既然科學已經證明了抗氧化對人體的重要性,那麽對抗
量化氧化效應是壹個亟待解決的問題。只有抗氧化效果可以量化,企業才能開發出更好的產品,才能獲得政府的認可,才能向消費者證明自己產品的抗氧化功效。
在ORAC法引入之前,因為極其復雜的抗氧化試驗,企業界(壹個極其復雜的實驗方案無法被企業界應用,當時壹個嚴謹的抗氧化實驗往往需要幾個月,費用極其昂貴,企業界無法接受)無法有效全面地測試樣品的抗氧化能力。但是,商業是技術創新的驅動力,就像蘋果壹樣。
ORAC的抗氧化測試包括對人體內五種主要活性氧自由基:過氧化物自由基(親水性和親脂性)、羥基自由基、過氧亞硝酸根、單線態氧和超氧陰離子的綜合分析,可以有效獲得樣品的實際抗氧化能力和分布。
ORAC抗氧化劑生物測試是比普通抗氧化劑測試更高水平的測試方案。通過使用人體細胞有效地測試了樣品的抗氧化能力(生物利用度)。
ORAC被美國AOAC評為抗氧化測試的標準方法,是國際主流的測試方法。
其他評估方法
抗氧化不僅僅是壹個概念,抗氧化對機體的作用也是可以定量測量的。作為動物實驗,壹般在服用抗氧化劑壹定時間後,測定血液中丙二醛(MDA)的變化和肝勻漿中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)的活性。從上述兩種酶和MDA的變化來判斷抗氧化的強度和效果。由於人體不可能測量肝勻漿,所以可以測量血液或尿液中的MDA、血液中的SOD和GXH-PX來確定抗氧化作用。
食品中的氧化劑早就引起了國內外學者的關註,因為:
①食物中的抗氧化劑可以保護食物免受氧化損傷和變質。
②在人體消化道具有抗氧化作用,防止消化道氧化損傷。
③吸收後可在身體其他組織器官發揮作用。
④食物中的壹些抗氧化提取物可作為治療藥物。抗氧化劑的作用機理包括螯合金屬離子、清除自由基、淬滅單線態氧、清除氧和抑制氧化酶活性。
體外評估方法
雖然有很多,但主要基於兩種:壹種是通過測量樣品抑制脂質物質氧化的能力來評價被測對象的抗氧化能力,另壹種是利用樣品對合成自由基的清除能力來反映被測對象的抗氧化活性。抗氧化劑在食品和生物體系中的抗氧化活性受多種因素影響,包括抗氧化劑在水相和油相之間的分配效應、氧化條件和環境、氧化底物的物理狀態等。
1.耐油過氧化物性的測定
脂質包括的範圍很廣,是生物膜的主要成分。脂質中的不飽和脂肪酸可被氧化,脂質過氧化過程中會產生L、LO、LOO-和LOOH等自由基,對生物細胞造成損傷。因此,抑制脂質過氧化具有重要的生物學意義。
硫氰酸鐵FTC:硫氰酸鐵(FTC)比色法是基於在酸性條件下,脂質氧化形成的過氧化物能將Fe2+氧化成Fe3+,然後Fe3+與硫氰酸根離子形成紅色絡合物,最大吸收在480-515nm範圍內。通常用500nm處的吸光值來表示物質抵抗脂質過氧化的能力。光吸收值越小,物質抵抗脂質過氧化的能力越強。
硫代巴比妥酸反應物TBARs法:是評價油品氧化程度的常用方法。油脂或亞油酸氧化的最終產物主要是丙二醛,這些過氧化物與硫代巴比妥酸反應生成有色化合物,在530nm左右被吸收。
2.DPPH清除能力的測定
DP是早期合成的有機自由基,常用於評價抗氧化劑的供氫能力。它在有機溶劑中非常穩定,呈紫色,有壹個特征吸收峰。當遇到自由基清除劑時,DPPH的孤對配對使其褪色,即在最大吸收波長處的吸收值變小。因此,可以通過測定吸收值的變化來評價樣品對DPPH自由基的清除效果。
3.還原能力的測定
還原力的測定是壹種測試樣品是否是良好的電子給體的方法。還原能力強的樣品應該是很好的電子供體,它提供的電子不僅能將Fe3+還原成Fe2+,還能與自由基發生反應。還原力的測定是評價抗氧化劑活性的常用方法。
4.抑制LOX酶的實驗
脂氧合酶LOX是壹種廣泛分布於植物中的非血紅素鐵蛋白,分子量為90-100KD。這種酶蛋白由多個皮鏈組成,含有三價鐵離子的金屬輔助基團是活性的,而含有二價鐵離子的金屬輔助基團是無活性的。其在生物體內的主要功能是特異性催化具有順式和順式戊二烯結構的多不飽和脂肪酸的氧化反應,生成具有* * *共軛雙鍵的多不飽和脂肪酸的氫過氧化物。生物體內的主要底物是甘油脂類(如磷脂)釋放的遊離不飽和脂肪酸,其中動物體內主要底物是花生四烯酸,植物體內主要底物是亞油酸和亞麻酸,主要產物是過氧化物羚羊脂肪酸。
上述方法是抗氧化劑應用效果的體內和體外測量和評價方法。