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rnai技術的基本原理

rnai技術的基本原理如下:

RNA幹涉(RNA interference,簡稱RNAi)是指壹些小的雙鏈RNA (double strand RNA,dsRNA)可以高效、 特異的阻斷體內 特定基因表達,促使mRNA降解,誘使細胞表現出特定基因缺失的表型。

RNAi是壹種高效的特異性強的基因阻斷技術。可以快速分析靶基因的功能,RNAi發展迅速,已成為功能基因組研究和反向遺傳學研究的有力工具。RNAi技術被《Science》雜誌評為2002年度的十大科技突破。?RNAi的分子機制

①外源性基因隨機整合到宿主細胞基因組內,產生壹些dsRNA。胞質中的核酸內切酶Dicer將這些dsRNA切割成多個具有特定長度和結構的短雙鏈RNA(大約21~25 bp),即siRNA。

②siRNA在RNA解旋酶的作用下解鏈成正義鏈和反義鏈,然後反義siRNA再與體內壹些酶結合形成RNA誘導的沈默復合物(RISC)。

③RISC與外源性基因表達的mRNA的同源區進行特異性結合,RISC具有核酸酶的功能,在結合部位切割mRNA,被切割後的斷裂mRNA隨即降解。

④RNAi信號的放大:siRNA不僅能引導RISC切割同源單鏈mRNA,而且可作為引物與靶RNA結合並在依賴RNA的RNA聚合酶(RNdependent RNA polymerase, RdRP)作用下合成更多新的dsRNA,

新合成的dsRNA再由Dicer切割產生大量的次級siRNA,從而使RNAi的作用進壹步放大,最終將靶mRNA完全降解。

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