②增加細菌質膜的通透性。質膜即細胞膜，在細菌中具有維持滲透屏障、運輸營養物質和排泄廢物的功能，並參與細胞壁、細菌蛋白質、酶和DNA的合成。細胞膜受損時，通透性增加，導致重要營養物質(核酸、氨基酸、酶、磷酸、電解質等)的滲漏和死亡。)在細菌的細胞質中，產生殺菌作用。如多肽類(多粘菌素B和硫黴素)和多烯類(制黴菌素、兩性黴素等)。).
③抑制細菌蛋白的合成。細菌細胞以活化的氨基酸、mRNA、tRNA和rRNA為原料，在多種重要酶的參與下合成蛋白質。細胞質中的核糖體是蛋白質合成的場所，蛋白質合成的過程可分為三個階段，即起始階段、延伸階段和終止階段。不同的抗生素對三期的作用不同，有的可以作用於三期，如氨基糖苷類，有的只作用於延長期，如林可胺。
④抑制細菌核酸合成。細菌核酸包括DNA和RNA，具有調節蛋白質合成的功能。新黴素、灰黃黴素和利福平可以抑制或阻礙細菌細胞中DNA或RNA的合成。因為它抑制了細菌細胞內核酸的合成，導致細菌死亡。