高效液相色譜儀測定茶葉中黃曲黴毒素B1的方法
1.適用範圍本方法適用於出口茶葉中黃曲黴毒素B1含量的檢驗。
2.原理概要樣品用三氯甲烷提取，提取液經矽膠柱凈化，凈化後的提取液用三氟乙酸衍生，用配有熒光檢測器的高效液相色譜儀測定，外標法定量。
3.主要試劑和儀器3.1.主要試劑三氯甲烷；正己烷；苯；甲醇：紫外光譜級；乙腈：紫外光譜級；三氟乙酸；乙腈-水溶液（1＋1）；三氯甲烷-甲醇溶液（95＋5）；苯-乙腈溶液（98＋2）；黃曲黴毒素B1標準品：純度≥99%；黃曲黴毒素B1標準溶液：準確稱取適量的黃曲黴毒素B1標準品，以苯-乙腈溶液於棕色容量瓶中，配成濃度為10μg/mL標準貯備液。根據需要，再配成適當濃度的標準工作溶液。3.2.儀器高效液相色譜儀，配有熒光檢測器；天津恒奧矽膠小柱；天津恒奧振蕩器：HMS系列；天津恒奧超聲波：HU、HS系列；
天津恒奧氮吹儀；天津恒奧濾膜：有機系用，0.45μm；天津恒奧微孔濾膜過濾器
旋轉蒸發器；微量註射器；離心管：5mL具塞磨口；粉碎機。
4.試樣的抽取與制備4.1.抽樣方法從整批產品堆垛的上下不同部位隨機抽取2.2規定的件數，逐件開啟。分別倒出全部茶葉於塑料布上，用取樣鏟從每件中各取出有代表性的樣品約500g。將所取樣品充分混勻，用四分法或分樣器逐步縮分出500g，裝入潔凈密封的樣品筒內，加封後，標明標記，及時送實驗室。4.2.試樣制備將所取回樣品全部磨碎，通過20目篩，混勻，均分成兩份試樣，裝入潔凈容器內，密封，標明標記。4.3.試樣保存將試樣於室溫下保存。註：在抽樣和制樣的操作過程中，必須防止樣品受到汙染或發生殘留物含量的變化。更多質量檢測、分析測試、化學計量、標準物質相關技術資料請參考國家標準物質藥檢所標準品目錄，藥品對照品請參考 /plist_3/plist_3_0_0_1.html
5.過程簡述5.1.提取稱取試樣5.0g（精確到0.1g）置於100mL具塞錐形燒瓶中，加入15mL三氯甲烷，於振蕩器上提取30min，然後經墊有玻璃纖維的漏鬥過濾。收集濾液於旋轉蒸發器的具尾管圓底燒瓶內，並用三氯甲烷洗滌濾渣，收集濾液至約20mL。5.2.凈化用旋轉蒸發器將上述濾液在50℃水浴中濃縮至約1mL，經0.45μm濾膜過濾後，註入矽膠小柱中。用2～4mL正己烷洗滌燒瓶後淋洗小柱，棄去流出液。然後用3～4mL三氯甲烷-甲醇溶液以每秒鐘2滴的流速洗脫，收集洗脫液於離心管中。用氮氣儀緩緩吹幹，供衍生用。5.3.衍生5.3.1.試樣加200μL正己烷和50μL三氟乙酸於上述離心管中，蓋緊磨口塞，超聲振蕩1min，靜置10min，用氮吹儀緩緩至幹。用乙腈-水溶液（1＋1）定容至1.0mL，超聲1min，用0.5μm濾膜過濾，濾液供液相色譜用。5.3.2.標準工作溶液取1.0mL標準工作溶液，用氮吹儀緩緩吹幹，按5.3.1步驟操作。5.4.測定5.4.1.色譜條件色譜柱：NOVA PAKc18，300mm×3.9mm（內徑）；流動相：甲醇-水溶液（42＋58）；流速：0.8mL/min；熒光檢測器：激發波長375 nm，發射波長425 nm；色譜柱溫度：室溫。5.4.2.測定根據樣液中黃曲黴毒素B1的含量情況，選定峰高相近的標準工作溶液。標準工作溶液和樣液中黃曲黴毒素B1衍生物的響應值均應在儀器檢測線性範圍內。對標準工作溶液和樣液的衍生物溶液等體積參插進樣測定。在上述色譜條件下，黃曲黴毒素B1衍生物保留時間約為8min。5.4.3.空白試驗除不加試樣外，按上述測定步驟進行。
6.結果計算用色譜數據處理機進行數據處理
7.低限和回收率測定7.1.低限本方法的測定低限為0.001mg/kg。7.2.回收率回收率的實驗數據：黃曲黴毒素B1的添加濃度在0.001～0.5mg/kg範圍內，回收率為89.1%～104.9%。