簡介:
增強型細胞計數試劑盒-8(enhanced cell Counting Kit-8)，即增強型CCK-8試劑盒，是壹種基於WST-8的快速、高靈敏、無放射性的比色檢測試劑盒，廣泛應用於細胞增殖和細胞毒性研究。在電子偶合劑的存在下，WST-8可以被線粒體中的壹些脫氫酶還原生成橙色的甲(見下圖)，細胞增殖越多，顏色越快。細胞毒性越大，顏色越淺。對於同壹個細胞，顏色的深淺(產生的甲的量)與細胞的數量成線性關系。
WST-8是MTT的升級替代產品，與MTT或MTT的其他同類產品如XTT、MTS相比優勢明顯，首先，線粒體中的壹些脫氫酶還原MTT產生的甲不溶於水，需要特定的溶劑才能溶解；WST-8、XTT、MTS生產的甲都是水溶性的，可以省略後續的溶解步驟。第二，WST-8產生的甲比XTT和MTS產生的甲更易溶解，第三，WST-8比XTT和MTS更穩定，使實驗結果更可靠。第四，與MTT和XTT相比，WST-8具有更寬的線性範圍、更高的靈敏度和更好的穩定性。
WST-8對細胞無明顯毒性，無需預先制備各種成分，可直接加入細胞樣品中。顯色後，可在不同時間反復讀板，檢測時間更靈活，便於確定最佳測定時間；酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。
使用說明:
該試劑盒可用於細胞因子誘導的細胞增殖檢測、毒性試劑如抗癌藥物對細胞誘導的細胞毒性檢測或某些藥物誘導的細胞生長抑制檢測。
細胞數量檢測
1.先用細胞計數板對準備好的細胞懸液進行細胞計數，然後接種細胞。
2.按比例依次用培養基稀釋形成細胞濃度梯度，設置5-7個細胞濃度梯度，每組3-5個孔。
3.接種後培養2-4小時使細胞貼壁，然後每100μL培養基用100μL CCK-8試劑培養100μL CCK-8 4小時，然後測OD值。？
4.最後以細胞數為橫坐標，OD值為縱坐標，繪制標準曲線。
5.在相同的實驗條件下，根據標準曲線可以計算出未知樣品的細胞數。
細胞活性檢測
1.將細胞懸液接種於96孔板中(每孔不少於5000個細胞/100μL為宜)，根據具體實驗條件培養過夜或壹定時間。
2.向每個孔中加入10μL CCK-8溶液，以避免產生氣泡。
3.將培養板在培養箱中孵育1-4h，孵育時間取決於細胞類型和細胞密度。2h的顯色效果最好。
4.用酶標儀測定450 nm處的吸光度；若OD值暫不測定，則在每孔中加入10μL 1%SDS或0.1M HCl，室溫避光保存，24小時內測定。
細胞增殖毒性試驗
1.將細胞懸液接種於96孔板中(每孔不少於5000個細胞/100μL為宜)，根據具體實驗條件培養細胞過夜或壹定時間。？
2.向每個孔中加入不同濃度的待測藥物。
3.將培養板在培養箱中孵育壹定時間。
4.向每個孔中加入10μL CCK-8溶液，以避免產生氣泡。
5.將培養板在培養箱中孵育1-4h，孵育時間取決於細胞類型和細胞密度。2h的顯色效果最好。
6.用酶標儀測定450nm處的吸光度；若OD值暫不測定，則在每孔中加入10μL 1%SDS或0.1M HCl，室溫避光保存，24小時內測定。
計算公式:
細胞存活率=[(ODS-ODB)/(ODC-ODB)]×100%。
抑制率=[(ODC-ODS)/(ODC-ODB)]×100%。
ODs:實驗孔(包括細胞、培養基、CCK-8溶液、藥物溶液)吸光度？
ODc:對照孔的吸光度(包括細胞、培養基、CCK-8溶液，不含藥物)？
ODb:空白孔的吸光度(包括培養基和CCK-8溶液，但不包括細胞和藥物)
註意事項:
1每個孔中使用的細胞數量取決於細胞大小、增殖速率和實驗的具體要求。建議單元格總數為0-105/
洞。
2.在實驗中，含有等量細胞培養基和CCK-8溶液但沒有細胞的孔可以用作空白對照。如果您擔心使用
藥物會幹擾檢測，所以需要設置壹個有等量細胞培養液、藥物和CCK-8溶液但無細胞的孔作為空白對照。
3 CCK-8的添加量根據培養體積確定，添加量為10ul/100ul培養體積。
4如果細胞培養時間較長，培養基顏色發生變化，建議更換培養基後再加入CCK-8。
為了使CCK-8試劑盒培養基充分混合，減少移液管上CCK-8的殘留，建議在加樣前用培養基稀釋？
CCK-8試劑，混合後加入樣品。
6如果待測體系中含有的還原劑(或抗氧化劑)會增加背景值，幹擾檢測結果，應在加入CCK-8試劑前加入。
這消除或減少了幹擾因素。
本產品僅限於專業人員的科學研究，不得用於臨床診斷或治療，也不得用於食品或藥品。
為了您的安全和健康，請穿實驗服和戴壹次性手套。
(以上來自套件說明)