石蠟切片法是以石蠟為包埋劑，用旋轉式切片機將材料切片，通過壹系列處理使之成為永久切片的方法。石蠟切片是研究植物細胞、組織、胚胎和形態學的最理想的方法。
石蠟切片法的壹般流程是:取材→固定→抽吸→洗滌→脫水→透明→浸蠟→包埋→修邊→切片→粘貼→染色→封口。
繪制材料
用鋒利的刀片切割新鮮的植物材料，選擇合適的材料並立即固定。
圖紙資料的註意事項如下:
(1)取新鮮材料，動作要快，以免擠壓損傷組織；取病理材料時，應設置對照材料。
(2)材質大小要合適:根、莖壹般直徑小於5 mm，切成5-10mm的段；壹般葉片過中脈，切成2-5毫米寬，5-8毫米長。切材料時，壹定要註意刀片與中軸線成直角，兩個截面平行，否則切片的細胞會傾斜。壹般來說，雌蕊和雄蕊是不需要分開的。
(3)根據切片要求，采樣時間可以不同。比如在植物發育的研究過程中，需要找到細胞分裂期，壹般取在陽光明媚的早晨9:00-10:00，此時植物細胞分裂活動明顯。
(4)材料不易過老化，否則難以成膜(過老化的材料必須在滑離切片機上制作)；多取材料進行縱向切割，比如根尖、莖尖，因為切到材料中間的概率低。
(2)固定
盡快將切割後的材料浸入體積相當於材料10-15倍的固定溶液中。在固定液的幫助下，細胞的新陳代謝會瞬間停止，細胞或組織的形態結構及其內含物的狀態不會發生變化，從而達到硬化組織、增強內含物折射率、使細胞易於著色的目的。同時，它還有防腐的作用。最好準備新鮮的固定液。
好的固定劑要有很強的穿透力，讓細胞馬上死亡，原生質全部凝固；在沒有任何變形的情況下，折射率增強，並且不妨礙染色。
常用固定液:
簡單固定劑用化學制劑制備的固定劑。
⑴乙醇是壹種固化的固定劑。通常使用無水乙醇或95%乙醇。
⑵甲醛是壹種不凝固的固定劑，有強烈的刺激性氣味。純甲醛是壹種無色透明的液體。固定濃度為4%-10%。
⑶醋酸是壹種固化的固定劑。它是壹種無色透明的液體，刺激性極強，在低溫下凝結成冰，所以又叫冰醋酸。
2.混合固定液:
它由幾種適量的試劑組成。混合原理是:①優劣互補；②擴張和收縮平衡；③強氧化劑和還原劑應分開配置。
常用的混合固定液如下:
(1) FAA固定液(福爾馬林-冰醋酸-乙醇)廣泛用於根、莖、葉、花藥和子房的組織切片，故又稱萬能固定液。壹般固定時間不少於24 h，這種固定劑的優點是適用於低溫(約65438±00℃)下材料的長期保存，可作為保存液使用。而且，固定的材料不妨礙染色。
⑵ Navaschjn的靜止液體最早是在1912中創建的。適用於細胞學和組織學的觀察，但由於滲透較慢，不能長期保存。主要用於顯示分相。
(3)抽氣
由於植物材料中的空氣，固定劑不能完全滲透。將材料放入固定劑後，需要立即進行抽吸，使固定劑有效地滲透到材料的組織中，消除材料中氣泡的幹擾。
壹般來說，泵送時間為20-30分鐘。當被泵送的物質停止泵送時，它應該沈到底部。
(4)洗滌
固定液中的成分可能妨礙染色或沈澱或結晶，影響觀察；它們中的壹些會繼續作用，從而使材料變質。因此，在使用材料時，應根據固定液的類型，用水、緩沖液或70%乙醇沖洗已滲入細胞的固定液。比如FAA固定的材料，在脫水過程中要用70%的乙醇洗幾次。若用水沖洗，可將材料從固定液中取出，放入指管中，加入半管水，用紗布紮緊管口，放置。
(5)脫水
清洗後，材料含有壹些水分，會分解材料。而且透明劑與水不相溶，不利於材料的後處理，如透明、包埋等。因此，需要用脫水劑逐漸除去材料中的水分，使石蠟滲透到細胞中。因此，脫水是生產中的關鍵環節。脫水劑必須與水混溶，並且可以用其他有機溶劑代替。
脫水必須在有蓋的玻璃器皿中進行，防止吸收空氣中的水分；更換較高脫水劑時，最好不要移動材料，以免損壞。
(6)透明度
透明劑既要和脫水劑混合，又要和石蠟混合，可以代替材料中的脫水劑，使石蠟順利進入材料。
二甲苯是目前應用最廣泛的透明劑，作用迅速，但容易使材料變脆。..
(7)浸蠟
是指逐漸去除材料中的透明劑，使石蠟充分滲透到材料中的過程。這樣，材料的所有部分都可以保持其原始結構和位置，切片不會斷裂或變形。
浸蠟是壹個循序漸進的過程，常用正丁醇。
每次浸蠟的時間根據材料的大小進行調整。
(8)嵌入
材料在蠟中浸泡足夠時間後，需要用蠟塊包裹起來切片。
操作方法:根據切片材料的大小，確定所需紙盒的尺寸，將表面光滑的紙盒進行預折疊。
(9)切片
即，用切片機將嵌入的材料塊切成所需厚度的切片。
(10)補丁
切片用粘合劑平鋪在載玻片上，便於染色和觀察。
常用的粘片有兩種:
(1)明膠粘合片
(2)蛋白粘附片
(11)染色
即根據植物細胞化學性質的不同，分別用染料進行染色，以便於觀察細胞和組織的形態結構及其在切片中的含量。基本的染色程序是脫蠟、染色、分色和封口。
染色方法可分為以下幾類:
①單染只用壹種染料。
②用兩種染料雙染，如藏紅花-堅牢綠；蘇木精-伊紅。
③多種染料多重染色，如藏紅花-堅牢綠-橙紅G；酸性品紅-苯胺藍-橙紅G等。
(12)密封儲存
密封在中性樹膠中，該材料可以在顯微鏡下清晰顯示並長期保存。
方法:將裝有材料的載玻片放在吸水紙上(切片面朝上)，迅速在切片中央滴壹滴口香糖(必須在二甲苯幹燥前完成)，右手用鑷子輕輕夾住蓋玻片的右側，微微傾斜使其左側與密封膠接觸，然後慢慢放下，避免產生氣泡。
冰凍切片法:
冰凍切片的制作方法
(1)低溫恒溫箱制作冷凍切片的方法
1.本實驗室現有Shandon As 620 E低溫恒溫器的主要性能。機器的盒面上有壹個電子控制面板，面板上有壹個速凍鍵和壹個除霜鍵。當啟動瞬間凍結鍵時，機器將立即工作，並持續10分鐘。啟動瞬間除霜按鈕可以去除車間頂後制冷網格上的霜，可以持續15分鐘。有壹個照明鍵，可以開啟照明車間，有利於工作和觀察組織的冷凍情況。配有消毒鑰匙，可以在工作壹周或壹天後啟動，對車間進行消毒。每天工作完了，就可以啟動鎖鑰匙鎖車間了。另外，盒面左側有四個按鍵，兩個是快速自動進退鍵，兩個是微小進退鍵，還有壹個手動旋鈕，在修復組織塊時調節進退。
冰櫃中左冰櫃溫度可達-60℃左右，中間有切片機。車間內的溫度可以在0-30℃之間任意調節，並顯示在櫃面的屏幕上。
2.操作方法和步驟:
(1)材料，不是固定的組織材料，不能太大太厚，厚的冷凍費時，大的難以完全切開，最好是24×24×2mm。
(2)取出組織支架，將組織平鋪，在其周圍滴入包埋劑，迅速放在冷凍臺上冷凍。對於小組織，先取壹個支架，滴入包埋劑使其冷凍形成小臺，然後放置小組織，滴入包埋劑。
(3)將冷凍組織塊夾在切片機支架上，啟動粗進和後退鍵，轉動旋鈕使組織變光滑。
(4)根據不同的組織，調整要切割的厚度。原則上是細胞密集的薄切，細胞稀疏的纖維可以略粗切，壹般在5 ~ 10um之間。
⑤調整防卷板。制作冰凍切片的關鍵在於防卷板的調整，需要操作者仔細準確地調整到合適的位置。切片時，切片能第壹時間順利通過刀防卷板之間的通道，平放在刀架的鐵板上。這時候可以把防卷板提起來，拿個載玻片貼上。
⑥應根據不同的組織選擇不同的冷凍程度。冷凍室的冷凍程度主要取決於不同的組織，不能壹概而論。比如切割未固定的腦組織、肝組織、淋巴結時，冷凍室溫度不能調得太低，在-10-15℃左右，切割甲狀腺、脾臟、腎臟、肌肉等組織時，可以調在-15 ~ 20℃左右，切割脂肪組織時，應
3.冷凍切片時的註意事項:
(1)防卷板和切片刀、刀架上的板要保持清潔，經常需要用刷子挑出殘留的切片，用軟紙擦拭。有時需要用紙擦拭每壹片。因為這個地方是切片經過和附著的地方，如果有殘留的包埋劑粘在刀或板上，會破壞甚至撕裂切片，所以切片不能被完全切下。
(2)當多個病例的多個組織需要同時冷凍時，可以放在不同的支架上，放在冷凍臺上冷凍，然後按照不同的編號依次切片，既不費時也不混亂。
③組織冷凍前，應根據組織的形態和走向進行放置。所謂“砍柴看柴勢”，切片也是如此。如果隨意擺放，不會得到好的效果。
(4)組織塊不需要各種固定劑固定，尤其是水性固定劑，固定後再使用。臨床快速冰凍切片不需要提前固定，壹是爭取時間，二是固定組織，增加了切片難度。如果冰凍切片是由沒有完全固定的組織制成，就會出現冰晶。這是因為在組織被固定之前，含有水的固定溶液中的水也可以滲透到組織中。當凍結發生時，水保留在組織中並形成冰晶。
⑤切片時，如發現過度冷凍，可將冷凍組織連同支架壹起取出，然後在室溫下停止切片壹分鐘，或在口中呼吸或用拇指按壓組織塊使組織軟化後再切片。另外，提高冰點。
⑥用於貼附切片的載玻片不能保存在冷凍的地方，但可以保存在室溫下。因為貼切片時從室溫取出的載玻片和冰櫃中的切片有溫差，當溫度較高的載玻片貼在溫度較低的切片上時，由於兩種物質的溫差，當它們碰撞時，分子相互轉移，產生吸附力，使切片和載玻片牢固地貼在壹起。如果用冰凍切片貼附切片，由於溫度相同，不會出現上述現象。
4.冰凍切片快速染色法
冰凍切片貼在載玻片上後，立即放入恒溫箱中的固定液中固定1分鐘，然後染色。以前，為了防止切片脫落，切片貼在載玻片上時，先用吹風機吹幹，然後固定。根據實驗對比，認為這種方法不適用於不固定截面。經過高溫後，蛋白質變性，細胞核中的壹些物質由於高溫而融合在壹起。染色後，細胞核內的各種物質在顯微鏡下無法分辨。冰凍切片貼在載玻片上後，立即固定在冷凍室的固定液中，使切片中細胞內的物質全部固定，沒有任何變化。經過壹年多制作1000個冰凍切片的實踐，認為固定切片好，核染色質清晰，核仁明顯，其他物質保存較好。
方法:
①切片固定30秒-1分鐘。
2洗滌。
③蘇木精染色3-5分鐘。
④分化。
⑤在堿水中變藍20秒。
⑥曙紅染色10-20秒。
⑦脫水、透明、中性膠密封。
組織冷凍1-2分鐘，切片1分鐘，固定1分鐘，染色* * * 5分鐘。快速制作過程在10分鐘內完成，結果與石蠟切片相當。
冰凍切片的方法很多，如甲醇循環半導體冰凍切片、二氧化碳冰凍切片、半導體冰凍切片、氯乙烷冰凍切片等。這些方法目前很少使用，這裏不做描述。