高氏 1 號培養基配方如下:
可溶性澱粉 20g
NaCl 0.5g
KNO3 1g
K2HPO4-3H2O 0.5g
MgSO4- 7H2O 0.5g
FeSO4-7H2O 0.01g
瓊脂 15-20g
水 1000ml
pH 7.4-7.6
III.7H2O、瓊脂、1mol/L NaOH、1mol/L HCl;
試管、三角燒瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、分液器、扭力天平、牛角匙、高壓鍋、pH 紙(pH5.5.0-9.0)、棉花、牛皮紙、記號筆、麻繩、紗布等。
四、操作步驟
1.稱量溶解
根據配方,先稱量好可溶性澱粉,放入小燒杯中,加少量冷水將澱粉調成糊狀,再加入適量不到的開水,繼續加熱,使可溶性澱粉完全溶解。然後依次逐壹稱取其他待溶解的成分。微量成分 FeSO4-7H2O 可配制成高濃度的貯存液後再加入,方法是將 1g FeSO4-7H2O 加入 100ml 水中至 0.01g/ml,再在 1000ml 培養基中加入 1ml 0.01g/ml 的貯存液。待所有藥物完全溶解後,補充水至所需的總體積。
牛肉膏蛋白腖培養基是應用最廣泛、最常見的細菌基礎培養基之壹,有時也稱為普通培養基。其中牛肉膏為微生物提供碳源和能量,磷酸鹽、蛋白腖主要提供氮源,NaCl 提供無機鹽。在配制固體培養基時還應加入壹定量的瓊脂作為凝固劑。瓊脂在常用濃度為 96℃時溶解,壹般實際應用時在沸水浴中或下面墊以石棉網煮沸融化,以免瓊脂燒焦。瓊脂在 40℃時凝固,壹般不會被微生物分解利用。固體培養基中瓊脂的含量因瓊脂的質量和溫度而異。
由於這類培養基主要用於培養細菌,因此要用稀酸或稀堿將其 pH 值調至中性或微堿性,以促進細菌的生長和繁殖。
牛肉膏蛋白腖培養基的配方如下:
牛肉膏 3g
蛋白腖 10g
氯化鈉 5g
瓊脂 15-20g
水 1000ml
pH 7.4-7.6< /p>
III.儀器
牛肉膏、蛋白腖、NaCl、瓊脂;
1mol/L NaOH、1mol/L HCl;
試管、三角燒瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、分液器、扭力天平、羊羹、高壓滅菌器、pH 試紙(pH 5.5 - 9.0)、棉花、其他材料。-9.0)、棉花、牛皮紙、記號筆、麻繩、紗布等。
四、操作步驟
1.稱量
按培養基配方比例準確稱取牛肉膏、蛋白腖、NaCl放入燒杯中。牛肉膏常用玻璃棒挑取,放入小燒杯或表面皿中稱量,用熱水溶解後倒入燒杯中。也可將牛肉膏放在稱重紙上,稱重後直接放入水中,這時如果稍加加熱,牛肉膏就會與稱重紙分離,然後立即將稱重紙取下。蛋白腖非常容易吸潮,應迅速稱量。另外,稱量藥品時要防止藥品混稱,壹個角勺稱量壹種藥品,或稱量壹種藥品後,洗凈、晾幹,再稱量另壹種藥品,瓶蓋不要蓋錯。
2.溶解
在上述燒杯中可先加少於規定量的水,用玻璃棒攪拌,然後,放在石棉網上加熱溶解。待藥物完全溶解後,再補充水至所需的總體積。若配制固體培養基,則將稱量好的瓊脂放入溶解好的藥物中,然後加熱溶解,在瓊脂溶解過程中,需不斷攪拌,以防瓊脂糊燒杯底破裂。最後補足失去的水分。
3、pH值
調節pH值之前,先用精密的pH試紙測量培養基的原始pH值,如果pH值偏酸,則用滴管向培養基中逐滴加入1mol/L NaOH,邊加邊攪拌,並隨時用pH試紙測量pH值,直到pH值達到7.6為止。而 1mol/L HCl 則用於調節 pH 值。註意,pH 值不能調得太大,以免回調,否則會影響培養基中各離子的濃度。
對於某些需要更精確 pH 值的微生物,可使用酸度計進行 pH 值調節(供參考)。
4.過濾
趁熱用濾紙或多層紗布過濾,以方便觀察結果。壹般無特殊要求,可省略此步驟(本實驗無需過濾)。
5.分裝
根據實驗要求,可將配制好的培養基分裝到試管或三角燒瓶中。分裝裝置如圖五-1所示。
分裝過程中註意不要使培養基沾在試管口或三角燒瓶口,以免沾汙棉塞,造成汙染。
(1)液體分裝的分裝高度以試管高度的 1/4 左右為宜。
(2)固體分裝分裝試管時,其裝量不超過試管高度的1/5,滅菌後做成斜面,如圖五-2所示。三角燒瓶的分裝量以不超過三角燒瓶容積的壹半為宜。
(3)半固體分裝試管壹般以試管高度的1/3為宜,滅菌後垂直待冷凝。
6.加棉塞
培養基分裝好後,在試管口或三角燒瓶口上加棉塞,防止外界微生物進入培養基而造成汙染,並保證有良好的通氣性能(棉塞的制作方法附在本實驗後面)。
7.綁紮
插好棉塞後,將所有試管用麻繩綁好,再在棉塞外包上壹層牛皮紙,以防滅菌時冷凝水打濕棉塞,再在外面用麻繩綁好。用記號筆標明培養基名稱、組別、日期。三角燒瓶加棉塞,外貼牛皮紙,用麻繩紮成活結狀,使用時便於解開,同樣用記號筆標明培養基名稱、組別、日期。
8.滅菌
上述培養基應在 1.05kg/cm2 (15 lb/in2), 121.3℃高壓滅菌 20 分鐘。如遇特殊情況不能及時滅菌,應放入冰箱保存。
9.擱置斜面
將滅菌後的試管培養基冷卻至50℃左右,將試管棉塞的壹端擱置在玻璃棒上,擱置斜面的長度以不超過試管總長度的壹半為宜。
10.無菌檢查
將滅菌後的培養基放入37℃的溫室中培養24-48小時,檢查滅菌是否完全。
附:棉塞的制作
棉塞的作用有兩個:壹是防止雜菌汙染;二是保證通氣良好。因此,棉塞的質量對實驗結果影響很大。正確的棉塞要求形狀、大小、松緊度與試管口(或三角燒瓶口)完全相適應,過緊妨礙空氣流通,操作不便;過松則達不到濾菌的目的。加塞時,應使塞長的1/3在試管口外,2/3在試管口內,如圖V-3。棉塞的制作過程,如圖V-4。
另外,在微生物實驗和科學研究中,經常用到通氣塞。所謂通氣塞,就是幾層紗布(壹般為8層)相互重疊,或在兩層紗布之間均勻鋪上壹層棉花而成。這種通氣塞通常加在裝有液體培養基的三角燒瓶口上。接種後,將其放在搖床上進行振蕩培養,以獲得良好的通氣條件,促進細菌的生長或發酵
/Biology/200701/20070106230740_25501.shtml
/Biology/200701/20070106230741_25502. shtml
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