1.最大耐受劑量(MTD)試驗
劑量:每只小鼠按 0.4 毫升/10 克的劑量服用 25% 濃度的護肝片,壹天 3 次,每 4 小時壹次。
結果:小鼠壹天內連續服用3次保肝片,最大耐受劑量為30g/kg提取物,約為臨床或成人用量的357倍(成人每次4片,壹天3次,全天總用量為12片,即0.35g×12片=4.2g/成人)。
結論:通過對小鼠最大耐受量的測定,可以認為肝片在臨床口服給藥中是比較安全的。
2.長期毒性試驗
劑量:保肝片高劑量組--大鼠服用保肝片(含3.57克提取物),劑量為5克/千克;保肝片低劑量組--大鼠服用保肝片(含1.43克提取物),劑量為2克/千克。
結果:
1)對壹般狀況的影響:試驗結果表明,大鼠連續60天服用上述劑量,服藥期間體重、行為活動、飲食正常,皮毛有光澤,無稀便等。
2)對紅細胞和血紅蛋白的影響:按上述劑量給大鼠連續用藥 60 天,對雌雄大鼠的紅細胞數和血紅蛋白均無明顯影響。
3)對白細胞、淋巴細胞和中性粒細胞的影響:結果證明,連續服用上述劑量 60 天,對雌雄大鼠的白細胞數、淋巴細胞和中性粒細胞均無明顯影響。
4)對肝腎功能的影響:采用比色法測定大鼠血清胃泌素氨基轉移酶,采用雙乙酰甲肟比色法測定大鼠血清尿素氮,結果經統計學處理證明,各劑量組對大鼠血清胃泌素氨基轉移酶均有明顯的降低作用(P<0.05),但各組值均在大鼠正常值範圍內,各劑量組對大鼠尿素氮無明顯影響。各給藥組對大鼠尿素氮均無明顯影響。
5)對血清總蛋白和白蛋白的影響:用亞硫酸氫鹽法測定大鼠血清總蛋白,用溴甲酚綠法測定大鼠血清白蛋白,結果表明,按上述劑量給大鼠飼餵60天,對雌雄大鼠血清總蛋白和白蛋白均無明顯影響。
6)對重要臟器系數的影響:各組大鼠處死後,分別稱量心、肝、脾、肺、腎和睪丸的重量,計算各組大鼠的重要臟器系數,最後進行統計學處理,結果證明,按上述劑量給大鼠服用護肝片60天,對雌雄大鼠的重要臟器系數均無明顯影響。
7)重要臟器的病理檢查:對上述各組大鼠進行放血、處死,取出各重要臟器,取樣,常規固定、切片、HE染色,在顯微鏡下觀察心、肝、脾、肺、腎、睪丸、卵巢等組織有無病理變化,結果如下:
心臟:心肌細胞、心內膜、心肌結締組織和毛細血管均無異常變化。心臟:心肌細胞、心內膜、心肌結締組織和毛細血管均無異常變化。
肝臟:肝細胞、肝小葉和小葉間結構無異常變化。
脾臟:紅、白骨髓細胞和結構無異常變化。
肺:各級支氣管組織和上皮組織無異常,肺泡、肺泡囊和肺泡壁無形態學變化。
腎臟:腎小球、腎小管和各種腎小管上皮未見異常變化。
睪丸:曲細精管中可見各級精原細胞,並有大量成熟的精母細胞和精子。
卵巢:組織和各種卵泡未見異常變化。
以上結果證明,大鼠連續口服護肝片,重要器官未見明顯病理變化。
結論:
上述長期毒性實驗結果表明,給大鼠口服5g/kg(含提取物3.57g)和2g/kg(含提取物1.43g提取物)60天,對大鼠體重、紅細胞、血紅蛋白、白細胞、白細胞分類無明顯影響;血清胃泌素轉氨酶、尿素氮、總蛋白、白蛋白及重要臟器系數、白蛋白、重要臟器系數無明顯變化;顯微鏡觀察重要臟器心、肝、脾、肺、腎、睪丸、卵巢無病理變化。根據上述實驗結果,認為口服該藥無明顯毒性反應。