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例子
摘要 目的 研究中草藥半夏超臨界CO 2 乙醇萃取物對不同驚厥動物模型的對抗作用。 方法 采用最大電休克和戊四唑驚厥模型，以托吡酯(Topiramate，TPM)為陽性對照，分析ig半夏超臨界CO 2 乙醇萃取物小鼠的量效、時效關系及抗驚厥率和死亡率; 結果 半夏超臨界CO 2 萃取物和TPM對MES有對抗作用，抗驚厥率分別達80%和90%(P<0.01)，且量效均呈正相關性。其起效時間為30min，1h達峰，作用持續7h。兩藥均可延長MET驚厥潛伏期(P<0.01)，對抗MET發作。 結論 半夏超臨界CO 2 乙醇萃取物可劑量依賴性對抗小鼠最大電休克驚厥，亦可對抗戊四唑驚厥。其抗驚厥作用性質和TPM相似，但抗最大電休克、戊四唑驚厥效應較TPM弱，作用持續時間較TPM短。
關鍵詞 半夏超臨界CO 2 乙醇萃取物 托吡酯 最大電休克驚厥 戊四唑驚厥
癲癇是臨床常見的多種病因引起的壹類臨床綜合征，治療難度大，發病率高。我國中醫藥治療癲癇已有兩千多年歷史，不但在中草藥治療癲癇方面積累了豐富的經驗，同時具有豐富的抗癲癇中草藥資源。半夏有燥濕化痰之功效，查閱近10年的文獻尚未見有關抗驚厥作用的動物實驗研究資料。為此，我們采用超臨界CO 2 流體萃取法(Super-critical-CO 2 Fluid Extraction，SFE-CO 2 )獲得半夏超臨界CO 2 乙醇萃取物作為研究對象，利用經典的MES、MET驚厥模型，以抗癲癇西藥為陽性對照，觀察其抗驚厥作用，為中醫藥治療癲癇提供理論依據，為半夏的開發利用奠定藥理學理論基礎。
1 材料
1.1 動物 健康普通級昆明種小鼠，體重18～22g，雌、雄(♀♂)皆用，合格證號為:314第070101號;由山西醫科大學實驗動物中心提供。
1.2 藥品及試劑 實驗用半夏(Pinellia Tuber，PT)購於山西省藥材公司，經山西醫科大學藥學系植化教研組鑒定後用於實驗。超臨界CO2 萃取由山西省康友藥業有限公司完成。萃取流程為:原生藥(5kg)-粉碎-進樣-CO 2 流體壓縮-萃取-減壓-分離-70%的乙醇作攜帶劑-得半夏超臨界CO 2 乙醇萃取物(supercritical-CO 2 alcohol fluid extrac-tions of Pinellia Tuber)，用前以蒸餾水配制。托吡酯(Topa-max)，瑞士Cilag公司生產，批號02CS063，用生理鹽水配制。戊四唑(Metrazol，MET)，荷蘭癲癇研究中心惠贈。
2 方法
2.1 最大電休克驚厥(Maximal Electroshock Seizure，MES)實驗 采用Swinyard [1] 法稍加改良。用JY-Ⅱ型電驚厥儀(山西醫科大學藥理教研室研制)兩個耳電極夾住小鼠雙耳部，按下列電刺激參數刺激:刺激強度70V、時間0.4s。以後肢強直為MES指標。實驗前12h篩選動物，凡刺激小鼠未見後肢強直者棄之不用。
取昆明種小鼠260只，隨機分為13個劑量組，每組20只，半夏CO 2 乙醇提取物5個劑量組按5.0、10.0、20.0、30.0、60.0(g/kg)ig給藥，托吡酯6個劑量組按0.032、0.063、0.125、0.25、0.5、1.0g/kg ig給藥，正常對照組ig等容積的生理鹽水。各劑量組小鼠ig給藥後，分別於15min、30min、1h、2h……12h用上述同樣參數刺激，記錄抗MES數，計算抗驚厥率，分析各藥作用高峰期的量效關系，用Bliss法計算各藥的ED 50 、ED 95 ，記錄藥後的起效時間、達峰時間和作用持續時間。
2.2 抗戊四唑(Metrazol Seizure Test，MET)驚厥實驗 取昆明種小鼠30只，隨機分為3組，每組10只。(1)半夏CO 2 乙醇提取物組19.49g/kg ig(2)托吡酯組0.22g/kg;(3)正常對照組ig等容積的生理鹽水，ig容量0.1ml/10g。藥後1h，皮下註射(sc)Met100mg/kg，以全身陣攣性驚厥為觀察指標，記錄驚厥潛伏期(Seizure Latency，SL)、驚厥數(凡註射戊四唑10min內出現驚厥者為陽性)和死亡數，計算抗驚厥率及死亡率。
2.3 統計學方法 結果均以ˉx±s表示，多樣本均數比較采用方差分析，全部數據均使用SPSS統計軟件壹次性處理，以P<0.05判定有統計學顯著差異。
3 結果
3.1 半夏超臨界CO 2 乙醇萃取物的抗MES效應
3.1.1 量效關系 Tab1-2和圖1顯示，以半夏超臨界CO 2乙醇萃取物和托吡酯的抗驚厥率為縱坐標，對數劑量為橫坐標可作出S形量效曲線，說明兩藥均有明顯的抗MES作用，且量效呈正相關性。前者抗驚厥率達80%(P<0.01)，ED 50 為19.46g/kg，後者抗驚厥率達90%(P<0.01)，ED 50 為0.22g/kg。
3.1.2 時效關系 半夏超臨界CO 2 乙醇萃取物和托吡酯的起效時間、達峰時間和作用持續時間見圖2。由圖可見，半夏超臨界CO 2 乙醇萃取物的起效時間均為15min，達峰時間均為30min，作用持續時間為7h，較托吡酯短(12h)。
3.2 半夏超臨界CO 2 乙醇萃取物的抗MET效應 Tab3表明，半夏超臨界CO 2 乙醇萃取物和托吡酯組分別與對照組比較均使小鼠MET驚厥潛伏期明顯延長，差異具有顯著性(P<0.01)，抗MET驚厥率為40%，托吡酯為30%，兩藥與對照組相比差異均無顯著性(P>0.05)，而半夏超臨界CO 2 乙醇萃取物組小鼠的死亡率為40%，與對照組相比差異無顯著性(P>0.05)，與托吡酯(50%)相比亦差異無顯著性(P>0.05)。
4 討論
癲癇是壹種發病率高、臨床治療難度大的中樞神經系統常見病。中醫理論認為，癲癇的病因是由多種因素導致痰濁內生，痰聚而氣逆不順，或氣郁化火，火生風動，挾痰上蒙清竅，橫竄經絡，內擾神明，而致癲癇發作，與心、肝、脾等臟器有關 [2] 。1993年衛生部制定了“中藥新藥治療癇癥的臨床研究指導原則”，對本病進行了辨證分型，分為風痰閉阻證、痰火內閉證、肝腎虧虛證、氣血淤滯證五種類型，在治療上以化痰、息風、瀉火、行氣、祛淤、補氣等為治療原則。半夏有燥濕化痰之功效。據報道，單用半夏粉治療癲癇12例，痊愈5例，顯效5例，無效2例 [3] 。目前為止，尚未見半夏抗驚厥作用的動物實驗研究資料。本實驗結果顯示，半夏超臨界CO 2 乙醇萃取物有較強的抗MES驚厥作用，最大抗驚厥率可達80%，且量效呈正相關性;可明顯延長戊四唑驚厥的潛伏期;說明半夏超臨界CO 2 乙醇萃取物對戊四唑驚厥也有良好的對抗效果。時效分析發現，半夏CO 2 醇提物在藥後30min起效，1h達作用高峰，抗驚厥作用時間可持續7h。目前公認，MES是癲癇大發作的實驗模型，是篩選對抗人類部分性和強直-陣攣性發作有效藥物的最有價值的實驗方法 [4] 。本實驗結果顯示，半夏超臨界CO 2 乙醇萃取物抗MES效能雖不及托吡酯(最大抗驚率為90%)，但作用性質與托吡酯相似，提示臨床應用半夏治療部分性和強直-陣攣性發作可能有效。戊四唑是GABA受體拮抗劑，主要通過影響與GABA相關的氯離子通道的活性，使中樞抑制功能減弱，神經元過度興奮，引起癲癇發作。壹般認為能明顯對抗MET的藥物可以治療人類的癲癇小發作 [4] 。本實驗結果顯示，半夏超臨界CO 2 乙醇萃取物抗MET作用較強，且作用性質與托吡酯相似，提示臨床應用半夏治療癲癇小發作可能有效。綜上結果可以推測，半夏是壹味有開發價值的抗癲癇中藥，我們將在後續的研究中進壹步提取其抗癇有效成分並進壹步作抗癇譜和抗癲癇機制的深入探討。