1儀器與試劑HP 1100型高效液相色譜儀；α-細辛對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：10298-0001）；β-細辛對照品（美國Sigema公司）；α-細辛原料藥（湖北天門天壹藥業有限公司，20040601）；註射用腦啡肽（武漢海泰生物制藥有限公司，規格：8 mg、註射用腦脊素（湖北天壹藥業股份有限公司，規格：2 ml; 8 mg，批號：20041010,20041011,20041012）；甲醇（色譜純，CAS 67-56-1 TEDIA COMPANY, ING USA）。
2 方法與結果
2.1 色譜條件
色譜柱：Diamonsil C18 色譜柱（250 mm×4.5 mm）：Diamonsil C18 色譜柱（200 mm×4.6 mm，5 wm）；流動相：甲醇-水（70：30）；流速：1.0 ml-min-1：檢測波長：258 nm；柱溫：25℃。
2.2線性關系及最低檢出限
精密稱取α-雀腦對照品25 mg，置100 ml容量瓶中，加流動相溶解並稀釋至刻度，搖勻。2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 ml 分別量入 25 ml 容量瓶中，加流動相溶解稀釋至刻度，搖勻，進樣量為 20 μl，進行色譜分析。濃度 C（微克-毫升-1）與峰面積 A 呈線性回歸關系。試驗結果表明，當腦中α-細辛胺的濃度在 20-100 μg-ml-1 範圍內時，它與峰面積呈良好的線性關系。在本文的色譜條件下，當噪噪比為3:1時，最低檢出量為0.48 ng。
2.3 回收率試驗
精密稱取已知含量的同批原料樣品5份，按樣品測定項下的方法加入α-細辛腦對照品5 mg，計算回歸率。結果見表 1。
表 1 樣品回收率試驗
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樣品中含量 加入量 測定量 回收率 平均回收率 RSD
(mg ) (mg) (mg) (%) (%)
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5.07 5.02 10.11 100.32
5.05 5.02 10.05 99.56< /p>
5.02 5.02 10.01 99.40 99.81 0.43
5.03 5.02 10.04 99.82
5.01 5.02 10.03 100.12
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2.4 精密度試驗
取濃度為 50.2 μg-ml-1 的對照品溶液，進樣量為 20 μl，重復測定 5 次。結果表明，α-黃精的色譜峰面積的平均值為1 027，RSD為0.6%（n=5）。
2.5穩定性試驗
分別於1、2、4、6、8 h取濃度為50.2 μg-ml-1的對照品溶液，進樣量為20 μl，峰面積的RSD為1.0%，表明α-阿拉伯呋喃妥因溶液在8 h內穩定。
2.6重復性
按照樣品測定項下的方法，取相同批號的樣品 5 份，進樣，測定其含量，RSD=0.4%（n=5）。
2.7 樣品的測定
精密稱取（或量取）適量（相當於約 25 mg α-苯腎上腺素），置於 100 ml 量瓶中，加入適量流動相，充分搖勻，使溶解並稀釋至梯度，搖勻，精密量取 5 ml 於 25 ml 量瓶中，加入流動相至梯度，搖勻，作為供試品溶液；另取約 25 mg α-苯腎上腺素。取α-環己亞胺約 25 毫克，置 100 毫升量瓶中，加流動相溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密取 5 毫升，置 25 毫升量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，作為對照品溶液。按上述色譜條件測定，進樣量為 20 μl，用外標法計算含量，見表 2；色譜圖見圖 1。
表 2 樣品含量測定結果（制劑為標示量）
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(%) (%)
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湖北天門天壹
制藥有限公司 α-腎上腺素原料藥 20040501 100.2 101.4
20040502 99.9 101.1
20040601 100.3 101.6
武漢海泰生物
制藥有限公司 α-苯巴比妥註射液 20040906 100.6 101.2
20040908 98.8 100.3
20040910 99.8 101.2
湖北天藥
股份公司 α-苯巴比妥註射液 20041010 99.5 99.9
20041011 99.1 99.5
20041012 99.2 99.1
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a. α-穗狀腦對照品 b. 樣品 c. 空白對照品 圖 1 HPLC 色譜圖
3 討論
3.1 國家藥品標準
化學藥品地方標準上升國家標準書 V α-細辛腦采用紫外法，原料和制劑 分別在 258 nm 波長和 313 nm 波長測定，此法波長不均勻，且β-細辛在此處也有吸收，此法專屬性較差，采用此法測定結果準確。
3.2測定波長的選擇
α-精氨酸腦被流動相溶解後，為了確定壹個較為合適的檢測波長，在200-400 nm處掃描，在此範圍內，α-精氨酸腦有兩個最大吸收波長，分別在258 nm、313 nm處，在檢測樣品時，在258 nm處波長的雜質檢測靈敏度較高，所以選擇258 nm作為檢測波長。
3.3流動相的選擇
對於流動相的選擇主要是甲醇和乙腈的比較，實驗結果如表 3 所示。
表 3 流動相比例的選擇
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20:80 60:40 70:30 80：水 25 min 無 22 min 峰 14 min 峰 5 min 峰
乙腈-水 25 min 無 22 min 峰 14 min 峰 5 min 峰
峰 αβ 分離 αβ 分離 αβ 分離 αβ 無法分離
更好 更好 上
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從以上結果可以看出，70：30效果較好，出峰時間早，β-細辛胺峰與主峰分離較好。從經濟價值考慮，甲醇比乙腈便宜，因此流動相選擇甲醇-水（70:30）。
3.4主要雜質的分離
α-細辛腦中的主要雜質為β-細辛腦、2.4.5-三甲氧基苯、2.4.5-三甲氧基苯丙酮，在該體系中可以得到很好的分離，用該方法對相關物質進行檢測，可以達到較好的分離效果。