(壹)樣品制備
1、稱取待檢豬肉樣品10g,置於50mL具塞離心管中;
2、加入2~3g無水硫酸鈉和30mL乙酸乙酯,均質1分鐘,5000rpm離心5min,吸取上層乙酸乙酯於濃縮瓶中;
3、殘渣重復加入15mL乙酸乙酯。
3、殘渣用 15 mL 乙酸乙酯重復提取,合並提取液;
4、提取液在 50 ℃ 水浴中旋轉蒸發(或用氮氣吹幹);
5、殘渣用 15 mL 乙酸乙酯重復提取,合並提取液;
6、殘渣用 15 mL 乙酸乙酯重復提取,合並提取液;
7、殘渣用 15 mL 乙酸乙酯重復提取,合並提取液。加入 1 mL 甲醇-氯化鈉溶液(20%甲醇:4 g/100 mL 氯化鈉溶液=20:80,v/v)和 4 mL 正己烷,搖勻後轉入 10 mL 帶塞離心管,離心管中加 1 mL 甲醇,用 1 mL 甲醇-氯化鈉溶液洗滌濃縮瓶,合並洗滌液;
5.渦旋 0.5 min,3000 rpm 離心 3 min,然後用移液管除去正己烷,加入 4 mL 正己烷,重復上述操作;
6.加入 4 mL 乙酸乙酯萃取水相 2 次,然後將乙酸乙酯溶液的萃取液在 50oC 下濃縮至幹(或在大氣下氮吹)。濃縮至幹(或氮氣吹幹),殘渣用 10mL 水溶解。
註:具體步驟參照 GB/T 9695.32-2009 《肉和肉制品中氯黴素含量的測定》
(2)固相萃取凈化
1.活化:取固相萃取柱 H2P 60mg/3mL(訂貨號:SSH2P063),用 2mL 甲醇和 2mL 水活化。
2.取樣:取樣時使用 1mL 提取液
3. 洗脫:1毫升20%甲醇
4. 洗脫:2毫升甲醇
5.濃縮:氮吹、1mL流動相溶解、0.45μm膜過濾
(C)液相檢測
Sepharose BR-C18, 120?
采用 SAGE BR-C18, 120 μm, 5 μm, 4.6×250 mm色譜柱(訂貨號:102185-4625)進行檢測,流動相為 50%甲醇,流速為 1 ml/min,檢測波長為 278 nm,進樣量為 20 μL。
H2P固相萃取柱可以去除樣品中的大部分雜質,避免雜質對實驗結果的幹擾,延長了萃取柱的使用壽命。延長了萃取柱的使用壽命。回收率測定顯示,氯黴素的回收率保持在 95%-105% 的高水平。