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水中大腸桿菌濾膜法檢驗

1. 消毒設備按照產品使用說明操作,待設備運轉正常後,取水樣進行消毒效果檢驗。消毒劑發生器按照產品使用說明書操作,待設備運轉正常後,在出口處采集樣品,按說明書規定的有效劑量稀釋後,進行消毒效果檢驗。消毒劑按產品使用說明書稀釋配制水樣。2. 細菌加標操作程序(1) 在脫氯自來水中加入大腸桿菌,實驗用菌種為大腸桿菌8099。加標量為>5×100-2×1000/100ml。(2) 將裝有加標菌水樣的三角燒瓶放入恒溫水浴箱(20℃)中,開動磁力攪拌器5min,使細菌在水中分布均勻。先取2份細菌加標的水樣,進行大腸桿菌活菌計數(陽性對照組)。(3) 待水溫恒定後按說明書規定的最小劑量加入消毒劑,迅速攪拌均勻,從加入消毒劑起計時。設定3個工作時間,說明書規定的最短作用時間為T,3個作用時間分別為0.5T,T和1.5T,作用後分別吸取水樣,註入裝有中和劑(如硫代硫酸鈉)無菌三角燒瓶中,以終止消毒作用。 對飲用水消毒處理器和消毒劑發生器應根據消毒產物的產生量及處理水最高流量進行加標采樣。(4) 將中和的水樣,分別取100ml、10ml、1ml各兩份,用濾膜法進行大腸菌活菌計數。(5) 將未接種大腸桿菌的試驗用同批培養基平板2個,置溫箱中培養(陰性對照組)。試驗重復三次。3. 上述試驗同時,測定消毒成分和劑量,記錄作用時間和水溫。4. 結果評價消毒後水中大腸菌群指標應符合《生活飲用水水質衛生規範》規定5.√- 必需測定項目 ; △ -如含有,需測定ki:ISSN:1004-8685.0.1991-01-021

正文快照:

水中細菌,包括致病菌與指標菌,因受自然條件或水處理過程的影響可以形成生理上存在缺陷,這些細菌稱為損傷菌.損傷菌在適宜條件下仍可發育成正常菌落,可是直接暴露於含有抑制劑的選擇性培養基時就不易生長.因此,現有遠藤培養基濾膜法有可能使大腸菌檢出菌數偏低,影響水質衛生學評價的準確性。為提高檢出率,本文在水中大腸菌損傷狀況及生長特點研究的基礎上,對現用遠膝培養基進行了改進研究. 壹、天然水及經不同條件處理後水中大腸菌損傷狀況見表l、2.裹l不同條件處理後水中大腸,抓傷狀況實較條件翻傷和.。,蔔飛,了氣P側價與腳腳日)‘t習分鐘…

ki.com.cn/Article/CJFDTotal-ZWJZ199101021.htm

1 材料 呋喃唑酮片(地產及市售,規格0.10g/片),混合纖維素酯微孔濾膜,孔徑規格0.45μm、1.2μm、3.0μm,大腸桿菌CMCC(B)〔44102〕、膽鹽乳糖增菌液(BL)、伊紅美藍瓊脂(EMB)及大腸桿菌生化反應用培養基均由中國藥品生物制品檢定所提供。

2 方法和結果 供試液先經離心,取上清液依次經過孔徑為1.2μm或3.0μm的微孔濾膜和0.45μm的微孔濾膜過濾後取0.45μm的濾膜加入BL中增菌。

2.1 由於呋喃唑酮幾乎不溶於水,故選用壹次離心法、二次離心法和離心-濾膜法〔1,2〕以及離心-雙重濾膜法進行方法比較,結果表明只有離心-雙重濾膜結合法能確保陽性菌的檢出。

表1 不同方法陽性菌的檢出試驗結果

方法 BL增菌48h EMB平板分離 大腸桿菌

檢出結果

壹次離心法 微混 未長菌落 未檢出

二次離心法 澄清 未長菌落 未檢出

離心-濾膜法 澄清 未長菌落 未檢出

離心-雙重濾膜法 混濁、產氣 典型的大腸

桿菌菌落 檢出

2.2 人工汙染呋喃唑酮片大腸桿菌的檢出情況 選用8批樣品加入大腸桿菌進行人工汙染5d後,采用離心-雙重濾膜法進行檢驗,結果表明8批均能檢出。

表2 人工汙染大腸桿菌的陽性檢出情況

藥品

批次 BL增菌

48h EMB

平板分離 大腸桿菌

檢出結果 檢出率

8批 8批出現混

濁、產氣 8批呈典型菌落 8批檢出 100

註:上述EMB平板分離的典型菌落均經生化反應確認檢出大腸桿菌

3 討論

3.1 雖然呋喃唑酮在水中的溶解僅達40mg/L〔3〕,但由於呋喃唑酮在BL增菌液中的最低抑菌濃度即MIC為0.01mg/L〔4〕,采用壹次離心、二次離心法均未能使BL增菌液中的濃度低於0.01mg/L,采用2次離心-濾膜法,則由於供試液經孔徑0.45μm濾膜過濾時殘留呋喃唑酮,當加入BL增菌液後,呋喃唑酮的濃度仍高於MIC,因此大腸桿菌仍無法繁殖,而本文采用的離心-雙重濾膜法,既能除去水中溶解的微量呋喃唑酮,又能把離心後上清液殘留的呋喃唑酮截留在孔徑1.2μm或3.0μm的濾膜上,最大程度地降低孔徑0.45μm濾膜上的呋喃唑酮,也降低了BL增菌液中的呋喃唑酮濃度,所以大大提高了陽性檢出率。

3.2 人工汙染大腸桿菌5d仍能檢出,說明離心-雙重濾膜法檢驗過程中不影響大腸桿菌在BL增菌液中的繁殖,能有效地保證樣品的陽性檢出率。

3.3 離心-雙重濾膜法能在很大程度上解決難溶於水的抗菌劑在BL增菌液中的濃度,故對今後開展口服抗生素控制菌的檢驗具有較高的參考意義。

3.4 因埃希氏桿菌屬的菌體,直徑為0.4~0.7μm,長度為1.0~3.0μm,筆者認為采用3.0μm孔徑的濾膜比1.2μm的濾膜可使實際檢驗效果更佳。同時,筆者也認為選擇何種規格的濾膜可因樣品而異,這方面還有待進壹步深入探討。/qikan/periodical.articles/haixyx/haix99/haix9903/990393.htm

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