1、加入二氧化矽的原因：有利於充分研磨
2、加入碳酸鈣的原因：防止色素破壞。研磨時會破壞溶酶體，溶酶體裏面的有機酸會流出來而色素中有Mg，碳酸鈣能和酸反應，防止酸和鎂反應，破壞了色素。
3、加入無水乙醇的原因：光合色素易溶於無水乙醇等有機溶劑中，可以用無水乙醇提取綠葉中的光合色素。
4、層析液的作用：光合色素可溶於層析液中，不同的光合色素在層析液中的溶解度不同。溶解度高的光合色素隨層析液在濾紙上擴散得快；溶解度低的光合色素在濾紙上擴散得慢。這樣，最終不同的光合色素會在擴散過程中分離開來。
（1）提取光合色素
用天平稱取5 g綠色葉片，剪碎，放入研缽中。向研缽中放入少量二氧化矽和碳酸鈣，加入10 mL無水乙醇（也可用丙酮），迅速、充分地研磨。在玻璃漏鬥基部放壹塊單層尼龍布，將漏鬥插入試管。將研磨液倒入漏鬥，及時用棉塞塞嚴盛有濾液的試管。
①剪碎和加二氧化矽的作用：利於研磨充分
②加入碳酸鈣的原因：防止色素破壞。研磨時會破壞溶酶體，溶酶體裏面的有機酸會流出來而色素中有Mg，碳酸鈣能和酸反應，防止酸和鎂反應，破壞了色素。
③加入無水乙醇（丙酮）的原因：光合色素易溶於無水乙醇等有機溶劑中，可以用無水乙醇提取綠葉中的光合色素。
④迅速研磨：防止乙醇揮發和色素的破壞。
⑤單層尼龍布的作用：過濾、去除雜質。
⑥用棉塞塞嚴的原因：防止乙醇（丙酮）揮發、提取液變少、變幹。
（2）制備濾紙條
將幹燥的定性濾紙剪成長與寬略小於試管長與寬的濾紙條，將濾紙條壹端剪去兩角，在此端距頂端1 cm處用鉛筆畫壹條細橫線。
①濾紙條的長與寬略小於試管：既能使濾紙條輕松地放入試管內，易於取出，也能防止濾紙條太小，彎曲塌陷在試管內。
②剪去濾紙條兩角的作用：1.保證濾紙能立在燒杯中2.保證濾紙上的濾液線能水平向上擴展。
③1 cm：保證濾紙條有足夠的長度泡在層析液中，又能使色素帶不浸在層析液（分離液）中。
④用鉛筆，不能用簽字筆、圓珠筆、畫筆的原因：簽字筆、圓珠筆、畫筆的筆液色素會也能溶於乙醇和層析液，汙染從綠葉中提取的色素。
（3）畫濾液細線
用毛細吸管吸取少量濾液，沿鉛筆線均勻畫細線（也可用玻片較短那壹端的邊緣沾取濾液後，印在濾紙條上）。待濾液線幹後，重復畫線壹兩次。
①濾液線要細，要均勻：保證濾液色素在同壹起始點上。
②待濾液線幹後再重復畫線的原因：既保證了濾液線的色素量，也防止濾液線過寬。畫的次數越多，色素量越多，越好跑，色素帶也就分得越開，越清楚。
（4）分離光合色素
將適量的層析液（分離液）倒入試管，將濾紙條畫線壹端朝下，輕輕插入層析液中，迅速塞緊試管口。
①適量的層析液：保證足量用於色素的分離，防止層析液浸沒濾液線，也防止空氣汙染（層析液易揮發、有毒），避免試劑的浪費。
②層析液的作用：色素可溶於層析液中，不同的色素在層析液中的溶解度不同。溶解度高的色素隨層析液在濾紙上擴散得快；溶解度低的色素在濾紙上擴散得慢。這樣，最終不同的色素會在擴散過程中分離開來。
③註意不要讓層析液觸及濾液線。接觸後會使大量濾液溶於層析液中，導致實驗失敗。
④塞緊試管口的原因：層析液易揮發，且具壹定的毒性。
（5）觀察、記錄
待層析液上緣擴散至接近濾紙條頂端時，將濾紙條取出，風幹。觀察濾紙條上所出現的色素帶及其顏色，並做好記錄。
最後濾紙條上將分離出四條色素帶，顏色從上往下分別是橙黃色、黃色、藍綠色和黃綠色，四種色素分別是胡蘿蔔素、葉黃素、葉綠素a和葉綠素b。