進壹步:
首先挑取菌落置於甘露醇生化試管中,37度,過夜,觀察結果,變色為陽性,進壹步凝固酶試驗可分為兩種方法,壹種是玻璃片法,壹種是試管法該菌為兼性厭氧菌。鑒定非常簡單,任何微生物檢驗書上都有。
下面是壹個參考。
金黃色葡萄球菌在形態學和特征學上可以直接鑒定,有壹些材料,希望對樓主有所幫助,
首先,該菌為革蘭氏陽性球菌,細胞排列呈葡萄狀,無芽孢,無莢膜。
其次,在肉湯培養基中金黃色葡萄球菌呈渾濁生長,在胰蛋白腖大豆肉湯培養基中有時液體澄清,此時菌量較多呈渾濁生長。在血平板上菌落呈金黃色生長,有時也呈白色,菌落大而凸起,圓形,不透明,表面光滑,周圍有溶血圈。
再次,該細菌在 Baird-Parker 平板上生長的菌落呈圓形,光滑,凸起,濕潤,直徑 2-3 毫米,顏色灰黑,邊緣蒼白,周圍有渾濁區,外層有透明環。用接種針觸碰菌落,其硬度與奶油膠相當。偶爾也會遇到不溶於脂肪的類似菌落,但沒有渾濁區或透明環。
從長期儲存的冷凍或幹燥食品中分離出來的菌落顏色比典型菌落產生的黑色要淺壹些,外觀可能粗糙、幹燥。(
貝爾德-帕克培養基.doc (24.0k)
還有壹些生理生化指標,如血漿凝固酶試驗。
血漿凝固酶試驗的方法是挑取菌落接種到肉灌湯中,在 37 攝氏度下培養 24 小時。實驗的壹般步驟是:吸取新鮮兔血漿(1∶4),放入小試管中,再加入培養24小時的金黃色葡萄球菌,振蕩後,置於36度水浴中,每隔半小時觀察壹次,觀察6小時,如呈現凝固現象(即、試管傾斜或倒置,呈現凝固者)則視為陽性結果,結合上述形態學特征,即可以初步斷定妳所感染的細菌不是金黃色葡萄球菌。
更詳細的實驗步驟請參考相關書籍,如實驗過程中樣品和試劑的用量等細節。
如做微生物限度,可參考《中華人民***和國家藥典》2005年版附錄十壹J第二部分。
金黃色葡萄球菌:取供試品溶液 10ml(相當於供試品 1g,1ml,10cm2),直接或經接種至適量(不少於 100ml)的鈉(鉀)碲肉湯(或營養肉湯)培養基中,培養肉湯)培養基中,培養 18-24 小時,必要時可延長至 48 小時。取上述培養物,用條痕法接種到卵黃氯化鈉瓊脂培養基或甘露醇氯化鈉瓊脂培養基平板上,培養 24-72 小時。如果平板上沒有菌落生長或菌落生長與表 5 所列特征不同,則判定檢測物品中未檢出金黃色葡萄球菌。
若平板上菌落生長與表 5 所列菌落特征壹致或疑似,應選擇 2-3 個菌落,分別接種於營養瓊脂培養基斜面上,培養 18-24 小時。取營養瓊脂培養基培養物作革蘭氏染色,
接種於營養肉湯培養基中,培養 18-24 小時,作血漿凝固酶試驗。
表 5 金黃色葡萄球菌
培養基 菌落形態
甘露醇氯化鈉瓊脂 金黃色,圓形凸起,邊緣整齊,周邊有黃色環,菌落直徑 0.7-1mm
卵磷脂氯化鈉瓊脂 金黃色,圓形凸起,邊緣整齊,周邊有卵磷脂分解的乳白色環。菌落直徑 1-2 毫米
血漿凝固酶試驗:取 3 支滅菌試管,每管加入 0.5 毫升血漿和無菌水混合物(1:1),再加入 0.5 毫升可疑菌株的營養肉湯培養物(或用營養瓊脂斜面培養制備的濃縮菌懸液)、0.5 毫升金黃色葡萄球菌營養肉湯培養物(或營養瓊脂斜面培養制備的濃縮菌懸液)、0.0.5 毫升金黃色葡萄球菌營養肉湯培養物(或營養瓊脂斜面培養基制備的濃縮菌懸液),即試管、陽性對照試管和陰性對照試管。3 個試管同時培養,3 小時後開始觀察,直至 24 小時。陰性對照管中的血漿應自由流動,陽性對照管中的血漿應凝固。如果試管中的血漿凝固,則血漿凝固酶試驗為陽性,否則為陰性。如果陽性對照管或陰性對照管不符合規定,則應制備血漿並重新檢測。
如上述可疑菌為非革蘭陽性球菌,血漿凝固酶試驗為陰性,則判定試材中未檢出金黃色葡萄球菌。
我也在做金黃色葡萄球菌的鑒定工作,因為樣本較多,所以只檢測兩個指標。
首先挑取菌落放在甘露醇生化管中,37度,過夜,觀察結果,變色為陽性,進壹步做凝固酶試驗,可分為兩種方法,壹種是玻璃片法,壹種是試管法,樓上幾位都說了具體方法,我就不在啰嗦了,希望對大家有所幫助。
非常感謝上面的建議,受益匪淺!
另外,我還想問壹下,金黃色葡萄球菌能在BHI瓊脂平板上生長,也能在專門的厭氧環境中生長嗎?它在形態上有什麽不同嗎?
謝謝!!!!!
典型的金黃色葡萄球菌呈球形,直徑約為0.8微米,在顯微鏡下成串排列。金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛,多數無莢膜,革蘭氏染色陽性。金黃色葡萄球菌對營養要求不高,在普通培養基上生長良好,需氧或部分厭氧,最適生長溫度 37°C,最適生長 pH 值 7.4。血平板上的菌落厚實、有光澤、呈圓形凸起,直徑 1-2 毫米。金黃色葡萄球菌耐鹽性較強,可在 10-15%的氯化鈉肉湯中生長。能分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖,產酸而不產氣。甲基紅反應呈陽性,P 反應呈弱陽性。許多菌株能分解精氨酸、水解尿素、還原硝酸鹽、液化明膠。金黃色葡萄球菌耐藥性強,對磺胺類藥物敏感性低,但對青黴素和紅黴素高度敏感。
保存觀察:從平板上挑取可疑菌落作革蘭氏染色,金黃色葡萄球菌革蘭氏陽性,鏡下呈葡萄狀排列,無芽胞、莢膜,直徑0.5-1μm。
血漿凝固酶試驗:吸0.5mL兔血漿與0.5mL金黃色葡萄球菌肉灌湯24小時培養液充分混合,置36±1℃,每半小時觀察壹次,觀察6小時,發生凝固,即、小試管傾斜或倒置時,內容物不流動,判為陽性。同時做陰性和陽性對照。
耐熱核酸酶試驗:將24小時肉湯培養物在沸水浴中處理15min後,用接種環接種,在甲苯胺-DNA平板上刺線,36±1℃培養24小時,刺種線周圍呈淺粉色者為陽性。此試驗對金黃色葡萄球菌呈陽性。
希望這些對妳有所幫助。