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如何進行家庭植物的組織培養?

家庭組織培養

植物的組織培養沒有最基本的條件和物品是搞不成的,當時合理的利用壹些最簡單的用具也並非無法辦到。

壹、最必需的物品

1、.家用高壓鍋 1個最好大壹點的,裝的東西多壹點。用於培養基、無菌水等的消毒

2、接種箱 (無菌箱)1個 ,需要自己自制,用壹些木板和壹塊玻璃和二尺布料。用於接種和轉移。

3、藥用天平1架 最好是500g稱量的,小壹點也可以,主要用來稱瓊脂、糖等物品。

4、不銹鋼鍋或鋁鍋(煮湯、面條的那種)買。用於煮制培養基用的。

5、攪拌和分裝培養基用的調羹壹個,用於煮制和分裝培養基。

6、培養用的瓶子若幹,

7、制棉塞用的棉花、紗布和線若幹,用於做瓶口的塞子,要註意的是,棉花要使用普通做棉衣的棉花,不要用醫院用的脫脂棉,這樣容易穿塞汙染。

8、牛皮紙、橡皮圈若幹,用於包瓶頭和紮包頭紙用。

9、酒精燈1盞、解剖刀1把,刀片若幹、鑷子2把、10ml、100ml量筒各壹個,2ml移液管1只、藥棉若幹。

二、怎樣解決蒸餾水和基本藥品

培養基的用水在壹般人的心目總是覺的十分重要的,其實是多余的擔心。冷開水、清潔的河水都是給以用的,並不影響培養的效果。市場上出售的純凈水更是壹般培養基理想的用水。最常用、最必要、用量最大的只需購買以下幾種就行了。

1、MS培養基的大量元素(家庭或所謂袖珍組培室的培養壹般采用MS基就可以了。)***5種。也可以買市售的MS培養基

(1)、硝酸銨

(2)、硝酸鉀

(3)、 氯化鈣

(4)、硝酸鎂

(5)、磷酸二氫鉀

2、酒精

3、精密試紙(PH 5.4-7.0)

4、漂白粉或漂白精

5、瓊脂

6、白糖

7、福爾馬林

8、高錳酸鉀(可以到醫院或藥材商店去買)

9、微量元素、鐵鹽、維生素類以及激素類藥品應用量極少。比如壹些激素、維生素類的藥品及有針劑也有片劑,他們都有比較準確的含量,妳可以去按妳的需要去配制比例。

愛好者在家庭環境下進行組織培養的探討與建議植物組織培養技術,尤其是快速繁殖,並非只有專業人員和專業實驗室才能夠完成的。作為對多肉植物和組織培養有著濃厚興趣的愛好者,在充分利用家庭條件的基礎上,同樣可以制備出自己的試管苗來的。在我們進行多肉植物的栽培中認識到,壹些比較名貴的園藝品種,比如:萬象、玉扇、壽、高紋鷹爪等十二卷屬品種,還是繽紛橄欖、何魯牽牛等塊莖類植物,甚至於星球屬、巖牡丹屬等等,這些植物的常規繁殖系數很低,他們都可以采用組織培養來解決其繁殖問題,並且可以得到相當數量的幼苗。對於奇想天外等種子萌發困難的植物,同樣可以借助組織培養來進行無菌播種。在進行組織培養過程中,不但可以對培養的植物有更深壹層的認識,對常規的栽培有著相當大的意義。許多搞組織培養的專家,最初都不是專業學組培的,就是憑著興趣和探索精神取得輝煌成績的。關鍵是,愛好者有著濃厚的興趣,非凡的觀察力和細致入微的操作,這些都可以彌補非專業的缺陷,並且可以充分利用日常生活中的各種可利用資源,這些就足以讓愛好者在家庭環境下完成組織培養了。同時這也不僅僅滿足了自己的興趣,還可以有壹定的經濟收益,甚至可以有所創新和發明。

壹、如何解決場地和基本設備:

進行組織培養,沒有壹定的設備是無法開展的。正規實驗室的組織培養設備是昂貴的,不適合家庭消費,但如果能有途徑買到廉價的實驗室設備,那就在好不過了。如果沒有辦法搞到實驗室設備,就不妨動手自己制作壹些簡單的設備。

1.無菌操作的主要設備——接種箱和壓力鍋:

接種箱:植物組織培養的主題操作需要在壹個相對密閉的無菌環境中進行。那麽說我們首先要創造壹個密閉的環境,可以利用壹些木料、塑料板、有機玻璃、鋁合金骨架等等廉價的材料,動手粘合壹個小巧的接種箱。具體的參數可以找壹本“食用菌栽培”的書籍,模仿種蘑菇的接種箱做壹個即可。需要註意的是,組織培養的接種箱的密閉性要求比較高,盡量避免腐朽的木材和易生銹的材料,箱子的頂端按放兩盞燈:20w的紫外線燈和20w的日光燈。箱體的周邊盡量采用玻璃材料,因為這樣便於觀察,有時候接種箱還可以借用為培養箱,周邊采用玻璃材料更方便於觀察和培養。

高壓鍋:主要用來對培養基和其他材料的滅菌。在實驗室通常使用醫用高壓滅菌器,然而在家庭要充分利用廚房使用的高壓鍋,高壓鍋的壓力要低於滅菌器,但是適當延長滅菌時間,還是可以取得較好的效果的。比如:對培養基滅菌40分鐘就基本上可以達到滅菌效果(滅菌器是20分鐘);無菌水采用間歇滅菌法,先用高壓鍋壓40分鐘,放置24小時,再壓20分鐘即可達到效果。

2.場地:

這個就因人而易了,總體的要求就是進行組織培養操作的地方要盡量無塵,減少空氣流動,最好有壹定的陽光。比如書房、寫字間都可以用來進行無菌操作。

進行培養基的配制可以借用壹下廚房,但所使用的器具必須和廚具分開。壹般說,組織培養中的幾乎全部化學物質對人體是無害的,除了少數激素類物質和滅菌劑。對於有毒害的物質,需要認真保管,以免發生危險。

3.輔助設備:

主要指冰箱,它是用來儲存化學物質和培養基的。天平,可以采用感量在100克的托盤天平,甚至用中藥的藥衡都可以代替。培養架,這個就更簡單了,采用鋁合金-玻璃的培養箱既可以滿足要求,如果日光不足,可配合日光燈補光等。

4.化學試劑:

化學試劑是不可缺少的,因為組織培養的核心就是培養基的成分,而並不是簡單的無菌操作。壹些用量較大的化學物質是有必要買的,比如大量元素(硝酸銨、硝酸鉀、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、氯化鈣等)、高錳酸鉀、甲醛、酒精、白砂糖、瓊脂等等。微量元素和有機復合物不需要購買,因為它們的用量很小,我們可以用蔬菜浸汁或者馬鈴薯浸汁來代替。激素是必不可少的,他們的稱量需要借助分析天平,但這是家庭條件所不允許的,如果有條件可以借助關系單位代替配成母液,每次取壹些使用即可。最好的辦法是到農資商店(賣農藥化肥的地方),它們壹般出售農業用的激素,有的是用安瓿裝的,按照壹定的比例加入到培養基當中即可。近幾年來,有些化學品公司開始生產植物組織培養基原粉,只需要稱取壹定量加水即可,很方便。比如泛生化學品公司生產的ms原粉,只需要稱量40克,加1升水,用微波爐加熱5分鐘即可分裝,相當簡便。

消毒劑通常采用氯化汞(劇毒),如果不容易搞到,可以用漂白粉代替。

調節酸堿度時,可以采用家庭常用的純堿和白醋。

5.培養容器和玻璃儀器:

組織培養的容器要求並不高,只要玻璃顏色為透明色即可(鈉玻璃不可以)。

我們可以到垃圾站去看看,撿回壹些廢舊的果醬瓶就可以了。比較好用的是阿香婆辣醬瓶,我們實驗室也是采用的這種瓶子。瓶子的封口膜采用聚丙烯塑料即可,如果不好找到,可以采用微波爐專用的錫箔紙甚至方便面的袋子,折疊成雙層,用橡皮圈固定即可。

其它玻璃儀器,比如燒杯、玻璃棒都可以用家庭的杯子和筷子代替;壹些度量儀器,如量筒和移液管最好到玻璃儀器商店購買,恐怕花不了20元錢就可以配置壹套相當棒的組培玻璃儀器。

6.其它:

還有壹些用品是必需的。比如精密ph試紙(5.4~7.0),需要買壹本,大約花1.5元即可搞定;酒精燈也不需要買,用墨水瓶配上壹個玻璃環,再加上壹個棉花芯,最後用農夫山泉礦泉水的瓶蓋做燈冒,這樣的酒精燈很小巧,適合接種箱使用。刀子剪子鑷子是必需的,到花市的工具攤位上,花10元錢全部搞定,註意選比較小巧的工具。

關於用水,按理說應該使用蒸餾水,但是我們家庭飲用的純凈水比蒸餾水還要純,那麽說借用壹些飲用水就可以了。我們曾經采用康師傅純凈水進行動物細胞的培養,效果都是很不錯的,更何況於植物細胞培養了。

以上是組織培養的基本設備和試劑,主要突出了他們相關的替代品,因為作為組織培養中的快速繁殖,它的要求是相當低的。我們的家庭培養和工廠化是不同的,工廠化生產組培苗要追求高增殖率,所以它的要求就比較精細和標準。我們的家庭培養則不需要那麽準確,只要達到培養成功的目的即可。當然,如果想提高增殖倍率和試管苗的品質,必須盡量貼近實驗室的用具和器材,代用品總是有壹定的缺陷的。

(壹)必須的設施物品及代用品

1、代用品

家庭用的電冰箱,可用於貯存培養基母液(4℃)及需低溫貯存的藥品(如生物調節劑)。

高壓鍋:它可用於培養基、無菌水、玻璃器皿及其他組培用具的消毒滅菌。如所用水硬度大可用涼白開水,進行消毒滅菌。避免被消毒滅菌物品表面結垢。

不銹鋼鍋或鋁鍋:它可用於培養基、溶化瓊脂(起水浴鍋作用)及組培用具消毒滅菌。

刷凈的廢棄食油桶:它可以用來貯存蒸餾水。

小白瓷碟:可以用於接種及盛放消毒液(若放消毒液,就不要再食用,以免中毒)。

日光燈:它可用於組培過程中光源補充。

洗凈廢棄的罐頭瓶:它可以用於組培培養之用,代替錐形瓶、試管。

組培場地可在自己的房間內進行。在配制培養基和接種時,不要趕在家庭成員較多時進行,如室內已安裝了空調,那麽在初代培養和繼代培養、乃至小苗過渡時均有好處。

2、自制用具

(1)接種箱的制作:組培過程中的超凈工作臺是很貴重的設備。如果我們用自制的接種箱來代替,就可以大大節省開支,有利於普及。

自制的接種箱的用料,可以是膠合板、纖維板、玻璃(3毫米厚)、木條(裝修房屋用的龍骨),甚至可以用使紙板的包裝箱(包裝箱的質量要稍好壹些的,如電視機的包裝箱),也可以用有機玻璃。

其接種箱的大小,可以根據各自的家庭條件制作。制作太小不便於操作,但相對來說消毒容易,且占地較少;制作較大的便於操作,但消毒工作顯得不易,且占地面積較多。壹般來說作成70厘米長、45厘米寬。50厘米高較為合適。

(2)培養箱的制作:培養箱可代替培養室,也可以用於過渡苗使用。它可以用玻璃制作,或利用長方形魚缸。因此,可用玻璃粘結制作。其大小可按自己家庭居室面積和組培的量來決定。

3、需購置用具

普通天平(500克):用於稱量配制培養基藥品,或用稱量金銀、中藥的戥子稱,用於稱量配制培養基藥品、微量元素及生物調節劑;或購買微量元素及生物調節劑時,買已分裝的。酒精燈1盞:用於接種時,灼燒消毒滅菌。漏鬥(亦可用購買桶裝食用油,所配給的漏鬥):用於分裝培養基用。長鑷子2把:用於接種。解剖刀2把、刀片若幹:用於接種。10、50、100毫升量筒各1個:用於配制培養基用。長把牛角勺2把:用於配制培養基取藥品。1、2、5毫升移液管各1個:用於配制培養基用。

耐高溫塑料膜或牛皮紙:用於包紮培養瓶口及表糊自制接種箱內部棱角處。橡膠圈:用於綁紮培養瓶口。脫脂棉:用於操作人員及組培用具酒精棉球消毒。pH(5~7)試紙1本:用時可剪成小條檢測培養基pH值。酒精1瓶:用於酒精燈及消毒。漂白粉1瓶:用於消毒。福爾馬林1瓶:用於接種箱消毒(在每次操作前2~10小時,將10~20毫升福爾馬林倒入小白瓷碟內,在操作前取出)。MS培養基所需藥品;用於配制培養基。鹽酸及氫氧化鈉:用於調pH值。如若購置1盞紫外燈,進行室內及接種箱消毒更為理想。

(二)操作時註意事項

家庭操作與單位不同,因而要註意以下事項:要註意安全,妥善保管藥品。特別對老人和小孩;操作時要消毒仔細嚴格,接種時操作人員戴好口罩、工作帽,避開電風扇及大風沙天氣,家庭成員多時避免操作;消毒前後避免家庭所養寵物進人工作間;藥品稱量要準確無誤;如果家庭不具備溫度調控(如調溫空調),應避免在盛夏、寒冬進行;紅掌組培要壹步步來作,可先作容易組培的花卉,待取得經驗後再做難作的花卉。

1.培養容器和玻璃儀器的準備:

進行培養基的配制首先要準備好培養瓶和配制使用的玻璃儀器。培養瓶壹般使用各種果醬瓶,要先用洗潔精浸泡瓶子4~8小時,再用流水沖洗數次。其他的玻璃儀器同樣需要這樣清潔,直到玻璃壁上不掛水珠而是成為水膜為止。清洗完畢的玻璃容器要倒扣,空去瓶內的水。

清洗幹凈的容器要註意防塵,盡量放置在玻璃櫃中。更簡單的是用幹凈的毛巾將容器蓋住。

移液管要用吸球來清洗,反復用蒸餾水吹吸直到潔凈為止,將移液管放置在壹個長筒中,便於使用。壹般移液管只能使用壹次,即要清洗,所以有多必要準備幾只移液管,建議:10ml/2支,5ml/2支,1ml/5支。

2.培養基的配制:

經典的組織培養用培養基是ms配方,其基本上劃分為:大量元素、微量元素、鐵鹽、有機復合物、植物激素、糖和支持物。這些成分的用量都在毫克級,用普通天平是難以稱量的,為了解決這個問題,我們可以按比例放大各成分的用量配制成母液,使用的時候按壹定比例加入即可。

下面將壹種ms培養基的母液配制方案公布如下:

大量元素:硝酸銨66.0克;

硝酸鉀76.0克;

無水氯化鈣13.3克;

七水硫酸鎂14.8克;

磷酸二氫鉀6.8克。

以上分別溶解後合並定容到1升,每配制1升標準ms培養基取25毫升。

鐵鹽:七水硫酸亞鐵5.56克;

乙二胺四乙酸二鈉(edtana)7.46克。

以上兩種分別加熱溶解,混合,定容到1升,調整ph到5.5以下,每配制壹升ms取5毫升。

微量元素和有機復合物的用量過於微小,為了簡便我們可以用蔬菜提取液或者馬鈴薯提取液代替。通常我們習慣用100克菠菜加100ml的水煮沸10分鐘,過濾留濾液,每配制1升ms培養基加入20~50毫升提取液。同樣也可以使用帶皮馬鈴薯100克加200毫升水煮沸15分鐘,過濾留濾液,每升ms加入50~100毫升即可。

加入上述各組分後,每升ms培養基還需要加入白砂糖30克,瓊脂7克。

這裏要說明的是,糖和瓊脂都是可變的量,要根據需要調整。另外制作果凍用的卡拉膠也可以代替瓊脂,透明度更好。

上述各成分加入後,定容到800毫升左右,用微波爐加熱,直到瓊脂全部溶解為止。此時加入所需的植物激素(通常配制成0.1%溶液,這樣每取1毫升,換算到培養基中就是1ppm)。然後加水定容到1100毫升(1.1升),之所以多出0.1升是為了抵消分裝和消毒中的損耗。最後用酸堿調整ph到5.8~6.0。

3.使用ms原粉配制培養基:

目前國內的壹些化學品公司開發了簡便的ms培養基原粉,大大簡便了培養基的配制,根據不同公司的說明選擇培養基的種類。下面就以ms原粉為例: ms培養基原粉,包括了大量元素、微量元素、鐵鹽、有機復合物、糖和瓊脂,壹般按使用方法稱量,微波爐加熱溶解,加入激素,定容到1100毫升(1.1升),調整ph值到5.8~6.0。

4.分裝:

將配制好的培養基分裝在培養容器中,註意要趁熱分裝,因為瓊脂在40度以下就會凝固。每個培養瓶裝培養基大約是瓶容積的1/6~1/5,註意不要將培養基掛在瓶的外壁,這樣容易造成汙染。分裝後用聚丙烯薄膜或著方便面的袋子封口,用膠圈固定(膠圈盡量選擇自行車的內胎,這種膠圈比較耐熱)。

5. 滅菌:

采用家庭壓力鍋消毒,建議到醫療器械用品商店買壹些“滅菌效果試紙”,它們可以指示滅菌效果,當滅菌達到效果時會變色。把試紙和培養基同時放入鍋內,加熱到有大量蒸汽冒出,再加上壓力伐,維持小火30~40分鐘。

滅菌完畢後自然冷卻,將培養基取出,放在陰涼無塵處備用。

6. 接種箱的準備:

新制作的接種箱必須要清潔幹凈,盡量做到無死角。每次使用前2小時,將操作所需要的全部物品放入接種箱,再用壹個小燒杯加入3~5克高錳酸鉀放入接種箱內,在箱內向燒杯中倒入2~3毫升的甲醛溶液,大約幾秒鐘後會看到甲醛蒸汽出現,這樣可以對接種箱內的所有物品進行初次消毒;同時打開紫外線燈照射。紫外線燈是高電壓穿激汞蒸汽產生的,紫外線進行第二道滅菌,在紫外線照射大約15分鐘後,會激發氧氣形成臭氧,臭氧作為第三道滅菌防線,這樣經過三次滅菌,接種箱基本上可以達到無菌標準。

在操作前15分鐘內,向剛才蒸發甲醛用的燒杯中倒入5毫升濃氨水,因為甲醛對人體有毒害作用,氨水可以和甲醛形成壹種叫做“六亞甲基四胺”的固體物質,從而中和了甲醛的刺激性蒸汽。這個時候紫外燈不要關掉,要繼續照射,直到操作前5分鐘關閉,維持黑暗5分鐘,然後再打開日光燈進行操作。維持5分鐘黑暗的原因是,紫外光對微生物的殺滅是作用於dna的胸腺嘧啶,形成四聚體,但是微生物具有壹種光復活蛋白,可以在有可見光的環境下還原胸腺四聚體,而使微生物復活,這個作用叫做“光復活作用”,所以在關掉紫外燈後必須維持黑暗幾分鐘,避免光復活作用的出現。

怎樣在家庭開展組培工作

制備

家庭組培因受到條件的限制,不可能配置大量的配養基,,壹般每次配置1升為宜。煮制後用PH試紙測定後,分裝成35-40瓶,塞好棉塞,包好包頭紙。(棉塞壹定要用作棉衣的棉花卷制,不能使用脫脂棉,然後用紗布包緊,用棉線紮好。棉塞的松緊以手提棉塞瓶子不滑落為宜。)然後放入高壓鍋裏高壓滅菌,待高壓鍋噴嘴噴出蒸汽時,扣上壓力閥,從壓力閥噴氣時起計時,連續維持15-20分鐘後關火,壓力消失後,打開鍋蓋,取出配養基,放入接種箱內待用。初次實驗時,滅菌後的培養基應放置三五天後,觀察無黴菌生長時才能使用。如有黴菌長出,這說明滅菌時間不夠,,需要適當增加滅菌時間。

接種

將滅菌後的配養基、無菌水、消毒藥水及使用的器材放入接種箱內,因接種箱內的體積相對較小,所以所用的壹切物品都要有序地擺放在相應的位置上,不能隨意擺放,箱內濕度較大,點酒精燈壹定要是用打火機,不要使用火柴。要特別註意準備好裝汙水、汙物的容器,盡可能地大壹些,因為操作時是不容許開箱取物的。把所有的物品放置好以後,將壹裝有10-20ml福爾馬林的磁杯放入箱內(最好不要使用玻璃杯,因反應時溫度較高,容易炸裂。),倒入2-5g高錳酸鉀(PP粉),使其蒸氣充滿箱內,達到滅菌的效果。這時要將接種箱的通氣孔和操作孔封閉好,避免甲醛蒸氣很快散盡。待箱內蒸氣散盡後,才能開始接種工作,這段時間大約需要5-10個小時。

接種時,揭去密封在接種箱通氣孔和操作孔上的密封物,取出熏蒸用的磁杯,將接種用的材料送入接種箱內,開啟紫外線燈,十五分鐘後關閉紫外線燈,開啟照明燈,即可開始工作。操作時壹定要樹立無菌觀念,要把壹切物品都看成是帶菌的,要時時都註意防範。工作是由於箱內溫度較高,濕度較大,手容易出汗,所以每接種壹瓶後都要用酒精擦拭手指,也可以戴指套。另外,操作時要註意防火,由於空間較小,壹不小心就容易燒傷手指或引起酒精起火。打開瓶塞時,要將瓶口置於酒精燈上方,用右手的無名指和小指夾住棉塞尾,輕輕將棉塞拔出,棉塞不能置於箱內物品上,應用手指夾住,接種後,將瓶口在酒精燈上燒灼壹下,棉塞也燒灼壹下,,然後在酒精燈火焰上方輕輕塞好,紮好包頭紙,用鉛筆標明品種、接種日期、編號等,然後重復下壹瓶。

其實,用接種箱接種與超凈工作臺相比較,工作時人要感覺舒適得多。汙染率也是很低的,操作熟練後幾乎沒有什麽汙染發生。接種後愈傷組織分化、小苗分化、生長狀態與在超凈臺上接種的沒有什麽兩樣。

培養

在家庭的業余條件下培養培養的條件不可能得到專控,所以要充分的利用自然條件,接種後的培養瓶可以放在有較強散射光的地方,如靠窗的書櫃、寫字臺上,但要避免日光直射,壹般室溫在22-28攝氏度時都能正常生長,不是特殊的品種不需要特殊的護理。如室溫太低,可以用紙板、木條、塑料薄膜做壹個簡單的培養箱,裏面裝壹兩個15-25瓦的白織燈,既可以補助光照也可以提高培養的溫度。夏天溫度過高時,有條件的可以擺放在空調室內,,沒有空調室的,降溫雖然困難壹些,但大多數試管苗是可以耐受的,不至於死去。小苗長出後,擺放在書櫃或工作臺上,感到自己培養出來的生機勃勃的小生靈,無疑是壹種享受。

栽培

當小苗長到壹定的時候,就可以配置壹些生根配養基將小苗轉移培養生根,待長出壹定根系時,就可以出瓶種植了。小苗出瓶種植的時候壹定要註意以下幾個方面,壹是要適當降低溫度;二是要增大濕度;三是要嚴格控制雜菌危害;四是要保證種植介質的疏松透氣;五是要保證適當的光照。我通常是用跖石、木屑、稻谷殼混合作基質,把小苗種植後用百菌清噴霧澆根,蓋上塑料薄膜,少量的小苗幹脆用玻璃杯蓋住,大約15天後就能揭去覆蓋物,便可進行正常管理了。

家庭開展組培其實也並不是壹件什麽很困難的事情,只要多開動腦筋,多想壹些辦法,做起來也是很容易地。萬事開頭難,辦法總比困難多。我1974年在壹個縣烤煙研究所裏當所長,原來條件不允許,科研經費很緊張,剛開始的時候,壹年的科研經費只有3000元,那年我做過煙草的花藥單倍體、水稻花藥培養、柑桔胚乳培養、黑皮果蔗莖尖組織培養、田三七愈傷組織培養、黑節草(石斛)種子的無菌培養、體細胞融合,都獲得了很好的成績,我們就是用這種方法做的,當時北京、上海很多的研究單位來看了很吃驚,他們認為很珍貴的組培小苗,被我們丟得到處都是,覺的不可思議,他們做不出來的,竟然在我們壹個十分閉塞的山區裏可以做出來。我說這個話的意思不是為自己吹噓擺功,而是告訴想從事這個行業的朋友,不要自己把自己的能量看得太低,也不要迷信權威、只要自己有信心,嚴格地按照科學的規律去做,沒有什麽做不了的,沒有什麽辦不到的。

家庭組培培養基的選擇與效果評價

選擇合適的培養基是植物組織培養成功的基礎。

選擇合適的培養基主要從以下兩個方面考慮:壹是基本培養基;二是各種激素的濃度及相對比例。

MS培養基適合於大多數雙子葉植物,B5和N6培養基適合與許多單子葉植物,特別是N6培養基對禾本科植物小麥、水稻等很有效,White培養基適合於根的培養。

首先試用這些培養基進行初步實驗,可以少走彎路,大大;減少時間、人力和物力的消耗。當通過壹系列初試之後,可再根據實際情況對其中的某些成分做小範圍調整。

在進行調整時,以下情況可供參考。壹是當用壹種化合物作為氮源時,硝酸鹽的作用比銨鹽好,但單獨使用硝酸鹽會使培養基的PH向堿性方向漂移,若同時加入硝酸鹽和少量銨鹽,會使這種漂移得到克服。二是當某些元素供應不足時,培養的植物會表現出壹些癥狀,可根據癥狀加以調整,如氮不足時,培養的組織常表現出花色苷的顏色(紅、紫紅色),愈傷組織內部很難看到導管分子的分化;當氮、鉀或磷不足時,細胞會明顯過度生長,形成壹些十分蓬松,甚至呈透明狀的愈傷組織;鐵、硫缺少時組織會失綠,細胞分裂停滯,愈傷組織出現褐色衰老癥狀;缺硼時細胞分裂趨勢緩慢,過度伸長;缺少錳或鉬時細胞生長受到影響。

培養基外源激素的作用也會使培養物出現上述壹些類似的情況,所以應仔細分析,不可輕易下結論。

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