Bio Focus 3000毛細管電泳儀(美國Bio Rad公司);熔融應時毛細管柱(無塗層)501μm×50cm(有效分離k度45.5cm,河北永年光纖廠);微孔膜(0.45微米)和過濾裝置(美國密理博);Milli-Qplus(美國)芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所);藥材(醫院中藥房提供);八珍丸(水蜜丸)和八珍木易丸(水蜜丸)(市售產品)的甲醇為色譜純,其他試劑為分析純。
2方法和結果
2.1測定條件:運行緩沖液:50 mmol/L硼砂緩沖液,用氫氧化鈉調節pH至10.6;工作電壓:20KV,極性從正到負;檢測波長:230nm;柱溫:20℃;采用壓力進樣,壓力進樣常數為10 psi× s,運行緩沖液和樣品溶液均經過0.45微米微孔濾膜過濾,然後采用毛細管沖洗法:每次啟動用超純水沖洗3min,然後用0.1mo1/L氫氧化鈉沖洗3次,再用超純水沖洗3min,再用運行緩沖液沖洗3min。每次測定之間用運行緩沖液沖洗1分鐘。
2.2對照溶液的制備和測定:準確稱取芍藥苷10.0 mg,在五氧化二磷真空幹燥器中幹燥36小時,用甲醇制成濃度為1.0 mg/ml的對照儲備液。取500μ1儲備液,置於lml容量瓶中,加入運行緩沖液至刻度,取樣測定。
2.3供試品溶液的制備和測定:按《中國藥典》(2000年版)中“八珍丸含量測定”項下供試品溶液的制備方法,制備八珍丸和八珍木易丸,用流動緩沖液稀釋至適當濃度,註射,測定。
陰性對照溶液:按處方比例和生產制備方法制備不含白芍的八珍L丸和八珍木易丸空白樣品,按供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液,進樣測定。
2.4標準曲線的制備:分別取芍藥苷儲備液62.5 μ l,125,250,500 μ l,1 000μl,用超純水定容至1ml。依次註射後,用藥物濃度(c)與峰面積遷移時間的比值(x)進行回歸,回歸方程為:c =-60。線性範圍為0.0625 ~ 1.0 mg/ml。
2.5精密度試驗:取濃度為0.25mg/ml的對照溶液,日內和日間重復進樣5次,測量峰面積與遷移時間的比值,計算精密度。日內RSD為1.61%;日相對標準偏差為3.15%。
2.6樣品回收試驗:在已知濃度的八珍丸和八珍木易丸樣品溶液中加入適量芍藥苷對照品溶液,進行樣品分析,測定含量。回收率結果見表12.7樣品含量測定:采用高效液相色譜法測定八珍丸和八珍木易丸的含量,同時參照《中國藥典》(2000年版)中“八珍丸”進行含量測定。
3討論
實驗研究了pH8-11的緩沖液。結果表明,當pH值大於9.0時,芍藥苷可以分離,且得到的峰形良好。當pH小於9.0時,芍藥苷的峰變形不良,遷移時間延長,因此最終確定最佳pH為10.6。在此條件下,芍藥苷能得到很好的分離,峰形良好,遷移時間適中。作者考察了硼砂濃度在25 ~ 100 mmol/L範圍內,發現隨著濃度的增加,分離度增加,但同時電流也增加。
從本實驗的分析結果可以看出,HPCE法對八珍丸和八珍木易丸中芍藥苷的定量測定準確有效,HPCE法對八珍丸的測定結果與高效液相色譜法的測定結果基本壹致。然而,與高效液相色譜法相比,HPCE法具有高效、快速、樣品體積小、溶劑用量少、抗汙染能力強等特點。《中國藥典》(2 000年版)(第壹部)采用HPLC法作為八珍丸中芍藥苷的定量方法,所需理論板數不少於2000,但本實驗所用理論板數可達100 000以上,分離效率大大提高。方法學考察結果令人滿意,該方法精密度高、穩定性好、重現性好。
本實驗結果無疑為八珍丸和八珍木易丸中芍藥苷的定量分析提供了壹種新的方法。也可為同類中成藥的質量控制提供參考。