(2)獲得目的基因後，要用DNA連接酶將目的基因與載體連接形成重組質粒，並導入大腸桿菌中獲得大量重組質粒。
(3)第三步是獲得含有5’AOX 1-3’AOX 1片段的基因，要選擇限制性內切酶Bgl切割重組質粒，獲得重組DNA，然後導入畢赤酵母細胞。
(4)5′AOX 1-3′AOX 1基因含有卡那黴素抗性基因，因此導入重組質粒的大腸桿菌可以抵抗卡那黴素，所以為了確認畢赤酵母是否轉化成功，需要在培養基中加入卡那黴素進行篩選。通過DNA分子雜交可以檢測轉化細胞是否含有HBsAg基因。
(5)畢赤酵母是壹種甲基營養型酵母，能以甲醇為唯壹碳源，甲醇能誘導AOX1基因的表達。因此，轉化酵母在培養基中培養壹段時間後，應加入甲醇以維持其生命，並誘導HBsAg基因的表達。
(6)細菌是原核生物，只含有核糖體，酵母是真核生物。除核糖體外，還含有內質網、高爾基體等細胞器。因此，與細菌相比，用畢赤酵母細胞作為基因工程的受體細胞，優點是蛋白質合成後，細胞可以對其進行加工(修飾)並分泌到細胞外，便於提取。
(7)限制性內切酶識別的序列壹般為回文序列。如果限制性內切酶切割DNA分子後形成的粘性末端為，則該酶識別的核苷酸序列為GACGTC..
所以答案:(1)SnaB？Avr避免了質粒和目的基因的自環化；
(2)DNA連接酶？大量的重組質粒
(3)Bglⅱ
(4)卡拉黴素
(5)甲醇
(6)加工(修改)
(7)中國海關總署