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ttc法測定根系活力為什麽用磷酸緩沖液處理植物根系

不會被空氣中的氧自動氧化,所以TTC被廣泛用作酶試驗的氫受體,植物根系中脫氫酶會引起的TTC還原

氯化三苯基四氮唑(TTC)是標準氧化電位為80mV的氧化還原色素,溶於水中成為無色溶液,但還原後即生成紅色而不溶於水的三苯甲瓚,生成的三苯甲瓚比較穩定,不會被空氣中的氧自動氧化,所以TTC被廣泛地用作酶試驗的氫受體,植物根系中脫氫酶所引起的TTC還原,可因加入琥珀酸,延胡索酸,蘋果酸得到增強,而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC還原量能表示脫氫酶活性並作為根系活力的指標。

1.1)TTC標準曲線的制作取0.4%TTC溶液0.2ml放入10ml量瓶中,加少許Na2 S2 O4 粉搖勻後立即產生紅色的甲攢。再用乙酸乙酯定容至刻度,搖勻。然後分別取此液0.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml置10ml容量瓶中,用乙酸乙酯定容至刻度,即得到含甲攢25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的標準比色系列,以空白作參比,在485nm波長下測定吸光度,繪制標準曲線。2)稱取根尖樣品0.5g,放入10ml燒杯中,加入0.4%TTC溶液和磷酸緩沖液的等量混合液10ml,把根充分浸沒在溶液內,在37℃下暗保溫1~3h,此後加入1mol/L硫酸2ml,以停止反應。(與此同時做壹空白實驗,先加硫酸與根樣品,10分鐘以後再加其他藥品,操作同上)。3)把根取出,吸幹水分後與乙酸乙酯3~4ml和少量石英砂壹起在研缽內磨碎,以提出甲攢。紅色提取液移入試管,並用少量乙酸乙酯把殘渣洗滌二、三次,皆移入試管,最後加乙酸乙酯使總量為10ml,用分光光度計在波長485nm下比色,以空白試驗作參比測出吸光度,查標準曲線,即可求出四氮唑還原量。

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