壹、主要材料
粗尿激酶(矽膠法生產)、甘氨酸(C P)、硫酸(A R)、氫氧化鈉(A R)和鹽酸。
磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉，疊氮化鈉，714樹脂。
二、試驗過程和技術條件
分析
1.取200克粗尿激酶(比活為325iu/mgP)，按8倍量混懸。英寸SM甘氨酸緩沖液，尿激酶濃度為4500 iu/ml，保持低溫，攪拌75分鐘，靜置45分鐘，虹吸分離上清液和底部沈澱物。
2.虹吸上清液後的沈澱加入1倍甘氨酸緩沖液，同上處理，取上清液。
3.合並兩種上清液，慢慢加入SNH:50。低溫下調節韌皮。石。. 1(采樣價)。
(2)714樹脂的脫色
1.根據分析溶液的滴定度，每1億單位用1.4kg樹脂，用幾個床體積的蒸餾水沖洗樹脂備用。
2.PH10。流速控制在1.8 ~ 2.0ml/cmZ，收集流出液。在柱裝載後，用壹個柱床體積的低溫蒸餾水洗滌柱。
3.用sNHZSO“”將組合柱流出液的PH值調節至10.0和0.1。
(3)超濾處理
1.將PH值設置為10。脫色液用超濾器超濾脫鹽，濃縮至原體積的六分之壹左右。
2.向濃縮液中加入低溫蒸餾水，稀釋至電導率為4.smV(10℃)。
3.再次濃縮至體積的六分之壹。
4.向二次濃縮液中加入低溫。0.18m，PH6.8磷酸鹽緩沖液和蒸餾水稀釋至原體積，兩者之比應使稀釋液的電導率為4.8×0.1mv(10℃時)。
5.用SNHZSO將PH值調節至6.8和0.1。
6.重新校準電導到4.8盎司。。低風速(10℃).
(4) CM-S交換凝膠純化(低溫)
用1預處理。CM-s:將CM-s浸泡在蒸餾水中，分別用Na0H和HCL處理，然後用0.18M處理，
用PH6.8的磷酸鹽緩沖液平衡，過濾；將平衡後的CM-S懸浮於含0.08%NaN:，0.18M，PH6.8的磷酸鹽緩沖液中，低溫冷藏。
2.CM-s吸附
(1)超濾PH6.8、電導率4.smV的尿酸溶液，加入平衡的CM-S以skg/億單位計，攪拌。
攪拌兩小時以防止起泡，靜置壹小時，虹吸出上清液。
(2)將吸附尿激酶的CM-S置於有機玻璃柱上，防止柱內起泡，使柱體光滑。
3.洗去雜質
(1)CM-s，然後用含0.3%NaN3、PH6.8和0.18M磷酸鹽緩沖液以1.8~的流速洗滌
2.。但/cmZ約為，出水效價低於10oiu/ min，光吸收峰28onm低於。. 04e/已經。
(2)使用1。SMPH6.8磷酸鹽緩沖液洗壹個半床體積。流速恒定，流出液的280nm吸收峰應降至0.03以下。
4.尿酸洗脫
(1)洗滌後，用0.08MP、H8.8磷酸氫二鈉和0.95M氫氧化鈉緩沖液以流速洗脫。. 4 4ml/cmZ，測定流出液的效價和280nm處的吸收峰，結合活性流出液，使混合液的濃度在S000in/ml以上。
(2)調節混合溶液的pH值至6。~7.0.取樣分析後，放入2升塑料瓶中，用幹冰冷凍，22℃以下低溫保存。
(5)尿酸滴定度和比活性的測定[英國]
1.測試原理
(1)主要試劑和設備
恒溫水浴，帶刻度的鬧鐘，熒光燈，英國滴定度圖紙，牛凝血酶(T)，牛纖溶酶原(PG)，牛纖維蛋白(FG)，英國標準，巴比通鈉，Tri。納澤塔
(2)試劑制備
t:牛凝血酶40BP(衛生部藥物和生物制品研究所)，每個分支加入6.6 ml巴比妥鈉緩沖液。
PG:牛纖溶酶原22BP(衛生部藥品生物制品研究所)，每支加24mlTris緩沖液。
PG-T:取PG6.6nil和配好的6。抗t混合液，混合均勻，放入50血三角瓶中，紮口備用。
FG:纖維蛋白原片，12sBP(衛生部藥品生物制品檢定所)，每支加18mlBarbiton-Na。
緩沖溶液。
(3)標準英國稀釋
用巴比妥溶液將標準品(100 iu/件)稀釋至60in/ml。
(4)繪制標準曲線
①取4支5點鐘位置的試管，分別做好標記，加入FGO.3
②分別加入0.4、0.3、0.2和0.lm稀釋的標準UK溶液。
③分別加入0.6、0.7、0.3和0.9倍的巴比妥溶液；
(4)分別加入0.4mlPG-t，搖勻，立即放入37℃恒溫水溶鍋中，記錄時間；
⑤觀察氣泡上升，當體積減半時，記錄結束時間；
⑥繪制以單位滴定度為橫坐標，時間為縱坐標的標準曲線，要求直線上至少有三點。
(5)樣品檢測
(1)繪制標準曲線後，在相同的條件下，用相同的試劑、樣品進行檢測；
②分別加入FGO.3ml、巴比妥緩沖液0.gml和PG-至. 4mh。
③其余步驟同前。
(6)測量外徑值
加酸後將樣品稀釋10倍，然後測量其O D值。
(7)計算滴度和比活性。
①根據供試品的氣泡上升時間，找出標準曲線上相應點的滴定度，乘以20，得到樣品。
實際滴度。
②總滴度~單位滴度(iu/mDx總體積(ml)
③比活性~平均滴度xl.75/0 D
2.產品收率和比活度的測定
①測定分析溶液的總滴度和比活度，結果如下:
總效價:2489萬單位，比活:325iu/mgP。
②精制後的總效價和比活。
總滴度:654.38+00.82萬單位；比活度:“660iu/mgP”
③精制收率:41%
三。討論
1.尿激酶通常以兩種分子形式存在，即分子量36。。。和54000，具有高分子量的尿激酶活性。
低分子量尿激酶的活性強得多。為了提高比活性，需要除去雜質和低分子量尿激酶。
分離出的低分子量尿激酶可以回收和純化。
2.尿激酶作為活性物質，在純化過程中應防止其失活。在我們的研究過程中，首先，
熟練掌握尿激酶效價和比活的測定步驟，然後不斷改變操作條件，通過對各個過程的分析
對提高尿激酶產量和比活性的因素進行了研究，逐步摸索出最佳工藝條件。
3.將CM-S吸附後的母液和效價大於200iu/ml的部分CM-S洗脫液進行超濾。
分析和回收可用作原料。
用於提取尿激酶的男性尿液的pH值為
/ml，用3N氫氧化鈉調節pH至8.5-9。加入矽藻土吸附沈澱後，過濾矽藻土，用清水攪拌洗滌，甩幹，放入交換柱中，用氨水沖洗，向洗脫液中加入飽和磷酸二鈉，調節pH至8.0，再加入氯化鈉調節電導率至22Mn，過季乙酯，交聯多糖凝膠層析柱，再用磷酸鹽緩沖液洗脫，合並流出液。調節電導率至16~17Mn-'，過甲基纖維素層析柱，用氨水洗脫，收集洗脫液，加水透析，用離心機凍幹，即得尿激酶成品。上述尿激酶只是粗品，還可以用葡聚糖、肝素、人血清白蛋白等進行修飾和精制。增強其生物化學穩定性，延長其在人體內的作用時間。除上述分離方法外，還可以通過中性蛋白酶降解制備尿激酶。國外還有壹種DNA重組的方法，在大腸桿菌中培養尿激酶原。在提取尿激酶的同時，還可以從殘尿中提取人尿白蛋白。
尿激酶是壹種堿性蛋白酶，無抗原性、毒性等副作用，臨床上可用於肺栓塞、冠心病、腦血栓、心肌梗死、玻璃體混濁、眼底出血、顱內血腫、靜脈栓塞和急性
(慢性)腎小球腎炎等疾病的治療。還可用於治療纖維蛋白沈積引起的疾病，可作為抗癌輔助藥物。此外，尿激酶還可用於開發保健飲料、太空飲料和化妝品。作為鄉鎮企業，尿激酶產品的開發不僅投資少、效益高、能耗低，而且原料易得、工藝簡單、無毒無害、無汙染，值得推廣。