含菌量要求為 5×10cfu/ 片至 5×10cfu/ 片（根據活菌培養計數結果）。在環氧乙烷用量600mg/L±30mg/L、溫度54℃±2℃、相對濕度60%±10%的條件下，菌片上芽孢的存活時間應≥7.8min，殺滅時間≤58min，D值為2.6min～5.8min。
（2）菌載體（10mm×10mm，必要時以布片為代表）。隨滅菌對象增加或更換為其他載菌體。
（3）聚乙烯塑料袋（封裝切片，規格 60mm×40mm，厚 0.2min ～ 0.4mm）。
（4）活菌計數設備（見 2.1.1.3）。
（5）滅菌器使用說明書中規定的可處理的物品（裝載滅菌器達到滿載要求）。(1）按試驗要求配制枯草桿菌黑色變種懸浮液和菌片。切片放入雙層聚乙烯塑料袋中密封包裝，每袋 2 片。每次試驗用 20 袋。
（2）將滅菌物品放在上、中、下 3 層，每層內、中、外各設壹個點，***設 9 個點。每個點的物品中間布 1 袋，***需試驗菌片 18 袋。另壹袋（2片）菌片常溫條件下放置作為陽性對照。
（3）按說明書中規定的環氧乙烷濃度、作用時間、櫃內溫度和相對濕度，在滿負荷條件下進行環氧乙烷滅菌處理。根據滅菌器的使用情況，滿載物品。處理後，取出切片，移入5ml營養肉湯培養基中，37℃培養箱中培養，7d後觀察最終結果（定性培養試驗）。
對於難以確定結果的營養肉湯試管，取0.2ml懸液接種於營養瓊脂平板，用無菌L棒塗抹均勻，置於37℃培養箱中培養。塗片染色 48h 後，在顯微鏡下觀察菌落形態，或做其他試驗，以確定是否有試驗菌生長或生長。如果不是試驗菌，則應重復試驗。
（4）在試驗中，應同時設立定性定量的陽性對照組和陰性對照組。
（5）定量陽性對照組，用同壹批菌片在室溫下，待試驗組消毒或滅菌達規定時間後，立即將菌片2片分別置入盛有5.0ml PBS的試管中，各振蕩叩管80次。按 2.1.1.3 所示方法取洗液進行活菌培養計數。
（6）定性陽性對照組，用同批試驗菌片在室溫下進行，待試驗組滅菌後達到規定時間，立即將菌片2片，分別接種於5.0ml營養肉湯培養基中，置於溫箱中進行定性培養，觀察細菌生長情況。
（7）陰性對照組，同批試驗用未感染樣品 2 片，分別接種於 5.0 毫升營養肉湯培養基中，同時將未接種營養肉湯培養基放入培養箱中進行定性培養，觀察有無細菌生長。
（8）試驗重復 5 次。
（9）5次試驗中，每次試驗的陽性對照菌片，回收菌量應為5×10cfu/片～5×10cfu/片；定性陽性對照組，細菌生長良好；陰性對照應無細菌生長。如果陽性對照或陰性對照的結果不符合上述要求，則試驗無效，重新進行試驗。(1）溫度和相對濕度對環氧乙烷氣體的滅菌效果影響較大，應在試驗條件下嚴格控制。
（2）環氧乙烷液體能溶解聚乙烯、聚氯乙烯等，液體不能滴在此類物品上。環氧乙烷，無論是液體還是氣體，都會損壞賽璐珞產品。
（3）環氧乙烷易燃易爆，試驗現場應采取防火、防爆措施，不允許有明火和電火花。
（4）吸入過多環氧乙烷氣體會引起頭痛、嘔吐等中毒癥狀，嚴重時可引起肺水腫。工作環境應通風良好。每天工作 8 小時，環氧乙烷濃度不超過 1.82mg/m（1ppm），工作 15 分鐘，接觸濃度不超過 9.1mg/m（5.0ppm）。如果出現中毒癥狀，應迅速離開現場。輕者呼吸新鮮空氣，直至癥狀消除；重者及時送醫院救治。