Ames試驗的常規方法有兩種:斑點試驗和平板興奮劑試驗,具體操作如下:
1,抽查;
吸取試驗菌增菌培養後的菌液0.1ml,註入融化後保持在45℃左右的上層軟瓊脂中,加入0.3ml-0.4ml S9混合液進行S9活化,立即混勻,倒在底板上,整平,濃縮。
用無菌針鉗夾住已滅菌的圓形濾紙邊緣,將紙浸泡在試驗溶液中,或直接取固體試驗物貼在上層培養基表面。同時做溶劑對照和陽性對照,分別貼在平板上相應的位置。
將培養皿在37℃的培養箱中倒置48小時。紙的外圍長出密集的菌落圈,為陽性;菌落分散,密度與自發消退相似,為負。
3.平板興奮劑檢測:
在上層軟瓊脂中加入壹定量的樣品溶液和0.1ml的試驗菌溶液,加入0.3ml-0.4ml S9mix進行代謝活化。攪拌後迅速倒在底板上鋪貼凝結。
同時做陰性和陽性對照,每個處理3個平行。樣本壹般有4 ~ 5劑。開始時劑量範圍要大壹些,當有陽性或疑似陽性結果時,要在較窄的劑量範圍內確定劑量反應關系。訓練同上。
具有相同劑量的每個培養皿中回復菌落的平均數與每個陰性對照培養皿中自發回復菌落的平均數之比是誘變比(MR)。MR值≥2,且有劑量反應關系,背景正常,判定為致突變陽性。
擴展數據:
壹、食品安全毒理學評價實驗項目;
第壹階段:急性毒性試驗,試驗項目:
1.口服致死劑量(LD50)由霍恩氏法、概率單位法或科勒氏法確定。如果10g/kg體重的劑量仍未造成動物死亡,則沒有必要確定LD50。
2.如有必要,進行七天餵養試驗。以上兩個項目分別使用兩種性別的小鼠或大鼠。
第二階段:累積毒性和致突變性試驗,試驗項目:
1.累積系數法。使用兩種性別的大鼠或小鼠,每組20只大鼠。
2.二十天測試法。使用兩種性別的大鼠或小鼠,每個劑量組中有10只雄性和雌性。以上兩種方法任選其壹。
第三階段:亞慢性毒性(包括生殖和致畸)試驗和代謝試驗。測試項目包括:
1.90天飼養試驗。
2.飼養和繁殖試驗。
3.餵養致畸試驗。
4.傳統致畸試驗。
第四階段:慢性毒性(包括致癌作用)試驗,試驗項目:
兩年的慢性毒性試驗和致癌試驗可以合並在壹次動物試驗中進行。使用了雄性和雌性大鼠或小鼠。
2.食品安全性毒理學評價的實驗要求:
1.所有在中國創造的新化學物質壹般需要經過四個階段的測試。尤其是化學結構提示有慢性毒性或致癌可能性的,產量大,使用面積廣,攝入機會多的,四個階段的實驗都必須進行。
2.任何化學結構與已知物質(已通過安全性評價並允許用戶)基本相同的衍生物,均可由相關專家根據第壹、二、三階段試驗結果進行評估,以決定是否需要進行第四階段試驗。
3.對於在中國仿制並具有壹定毒性的化學物質,如果大多數國家已允許在食品中使用,且有安全性的證據,或世界衛生組織已公布每人每天允許攝入量(ADI,以下簡稱日允許量),且生產單位能證明我產品的理化性質、純度、雜質成分和含量與國外產品壹致,可先進行第壹、二階段試驗。
如果檢測結果與國外同類產品壹致,則不再繼續檢測,可以進行評估。如果評估結果允許在食品中使用,將設定每日允許量。凡產品質量或試驗結果與國外數據或產品不壹致的,應進行第三階段試驗。
來源:百度百科-艾姆斯試驗?百度百科-食品安全毒理學評價