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提質粒的目的是什麽?酶切的目的是什麽?

提質粒的目的是去除 RNA,將質粒與細菌基因組 DNA分開,去除蛋白質及其它雜質,以得到相對純凈的質粒。

酶切的目的是對粘末端的DNA分子和載體分子進行切割,以獲得相應的粘末端連接。酶切可以是單酶切也可以是雙酶切。

擴展資料:

1、提質粒原理

堿變性抽提質粒DNA是基於染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH值高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性。

質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋***價閉合環狀的兩條互補鏈不會完全分離,當以pH4.8的NaAc/KAc高鹽緩沖液去調節其pH值至中性時,變性的質粒DNA又恢復原來的構型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構,通過離心,染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等壹起沈澱下來而被除去。

2、酶切基本原理

利用限制性內切酶對DNA上特定序列的識別,來確定切割位點並實現切割,從而獲得所需的特定序列。

它可分為三類:Ⅰ類和Ⅲ類酶在同壹蛋白質分子中兼有切割和修飾作用且依賴於ATP的存在。Ⅰ類酶結合於識別位點並隨機的切割識別位點不遠處的DNA,而Ⅲ類酶在識別位點上切割DNA分子,然後從底物上解離。Ⅱ類由兩種酶組成: 壹種為限制性內切核酸酶,它切割某壹特異的核苷酸序列; 另壹種為獨立的甲基化酶,它修飾同壹識別序列。

百度百科——質粒抽提

百度百科——酶切

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