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家庭如何做植物組織培養?

家庭組織培訓

植物的組織培養沒有最基本的條件和物品是不可能的,合理利用當時壹些最簡單的器具也不是不可能的。

第壹,最必需的物品

1,1家用壓力鍋,最好大壹點,裝的東西多壹點。用於培養基、無菌水等的消毒。

2.有1接種箱(無菌箱),需要自己做,用壹些木板,壹塊玻璃,兩尺布。用於接種和轉移。

3.1醫用天平最好是500g,或者更小,主要用於瓊脂、糖等物品的稱量。

4.買不銹鋼鍋或者鋁鍋(煮湯煮面的那種)。用於蒸煮培養基。

5.用於攪拌和重新包裝培養基的勺子用於蒸煮和重新包裝培養基。

6、若幹個培養瓶,

7.許多棉花、紗布和線被用來制作棉塞,棉塞被用來制作瓶塞。需要註意的是,棉花要用普通棉衣,不要用醫院用的脫脂棉,這樣容易磨損堵塞,汙染。

8.有些牛皮紙和橡皮筋是用來包瓶蓋和包裝紙的。

9.65,438+0酒精燈,65,438+0手術刀,若幹刀片,兩把鑷子,壹個分別裝有65,438+00 ml和65,438+000 ml的量筒,65,438+0 2ml移液管和壹些脫脂棉。

二、蒸餾水和堿性藥物如何解決

培養基所用的水在壹般人的心目中總是很重要的,其實是壹種不必要的擔心。用的是涼開水,幹凈的河水,不影響養殖效果。市場上銷售的純凈水是壹般培養基的理想用水。最常用的,必要的,用過的,只需要買下面這些。

1,MS培養基中大量元素(家庭或所謂袖珍組培室培養壹般采用MS基礎。)***5種。也可以購買市售的MS培養基。

(1),硝酸銨

(2)硝酸鉀

(3)、氯化鈣

(4)硝酸鎂

(5)、磷酸二氫鉀

2.酒精

3.精密試紙(PH 5.4-7.0)

4、漂白粉或漂白精

5.瓊脂

6.精制糖

7.福爾馬林

8、高錳酸鉀(可以去醫院或藥店買)

9.微量元素、鐵鹽、維生素、激素很少用。比如壹些激素、維生素、藥物、註射劑、片劑,含量都比較準確,妳可以根據自己的需要來做比例。

家庭環境愛好者對組織培養的探討和建議植物組織培養技術,尤其是快繁,不是只靠專業人員和專業實驗室就能完成的。作為對多肉植物和組織培養有濃厚興趣的愛好者,也可以在充分利用家庭條件的基礎上,自己準備試管苗。在多肉植物的栽培過程中,我們認識到壹些稀有的園藝品種,如萬象、玉扇、壽衣、高雯鷹爪等。或塊莖植物,如彩色橄欖和賀魯牽牛,甚至還有行星和石櫟等。,常規繁殖系數低,均可采用組織培養解決其繁殖問題,獲得相當數量的種苗。組織培養也可用於種子萌發困難的植物的無菌播種,如花樣年天外。在組織培養過程中,我們不僅可以對培養的植物有更深入的了解,而且對常規培養也有很大的意義。很多從事組織培養的專家,壹開始並沒有專攻組織培養,而是憑著興趣和探索精神取得了輝煌的成就。關鍵是粉絲興趣濃厚,觀察力過人,操作細致,能夠彌補非專業的缺陷,充分利用日常生活中各種可利用的資源,足以讓粉絲在家庭環境中完成組織訓練。同時既滿足了自己的利益,又有壹定的經濟效益,甚至可以進行創新發明。

壹、如何解決場地和基本設備:

沒有壹定的設備,組織培養是無法進行的。正規實驗室的組織培養設備比較貴,不適合家庭消費,但是如果有辦法買到便宜的實驗室設備就太好了。如果拿不到實驗室設備,不妨自己做壹些簡單的設備。

1.無菌操作的主要設備-接種箱和高壓鍋:

接種箱:植物組織培養的主體操作需要在相對封閉的無菌環境中進行。那麽首先要營造壹個封閉的環境,可以用木頭、塑料板、有機玻璃、鋁合金骨架等壹些便宜的材料粘壹個小的接種盒。具體參數可以在壹本《食用菌栽培》上找到,模仿種蘑菇的接種盒做壹個就可以了。需要註意的是,組織培養的接種盒要求密封性高,盡量避免腐朽的木材和生銹的材料。兩盞燈放在盒子的頂部:壹盞20w的紫外線燈和壹盞20w的熒光燈。盒子的外圍盡量用玻璃材質,因為便於觀察,有時可以借用接種盒做培養箱,外圍用玻璃材質,更便於觀察和培養。

高壓鍋:主要用於培養基和其他材料的滅菌。醫用高壓滅菌器壹般在實驗室使用,但在家庭中,要充分利用廚房使用的高壓鍋。高壓鍋的壓力比滅菌器低,但是我們適當延長殺菌時間還是可以達到很好的效果。比如對培養基滅菌40分鐘(滅菌器為20分鐘),基本可以達到滅菌效果;無菌水是分次滅菌制成的,可以在高壓鍋裏壓40分鐘,靜置24小時後再壓20分鐘。

2.地點:

這對人們來說很容易。總的要求是進行組織培養的地方盡量無塵,減少空氣流動,最好有壹些陽光。例如,書房和寫字間可用於無菌操作。

可以借用廚房準備培養基,但是使用的器皿壹定要和廚具分開。壹般來說,組織培養中幾乎所有的化學物質對人體都是無害的,只有少數激素和消毒劑除外。有毒物質需要小心保存以避免危險。

3.輔助設備:

主要指冰箱,用來存放化學藥品和培養基。天平可以是靈敏度為100克的托盤天平,甚至可以用中醫的藥秤代替。文化架,這個更簡單。鋁合金玻璃培養箱可以滿足要求。如果太陽光不足,可以用日光燈補充。

4.化學試劑:

化學試劑是必不可少的,因為組織培養的核心是培養基的成分,而不是簡單的無菌操作。需要購買壹些用量較大的化學品,如大量元素(硝酸銨、硝酸鉀、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、氯化鈣等。),高錳酸鉀,甲醛,酒精,白糖,瓊脂等等。微量元素和有機化合物不需要購買,因為它們的用量很少,我們可以用蔬菜汁或馬鈴薯汁代替。激素是必不可少的,其稱量需要分析天平的幫助,但這是家庭條件所不允許的。如果可能的話,可以用關系單位代替做母液,壹次可以取壹些。最好的辦法是去農資店(賣農藥化肥的)。他們壹般賣農用激素,有的裝在安瓿裏,按壹定比例加到培養基裏。近年來,壹些化工公司開始生產植物組織培養基原粉,只需稱壹定量的水就很方便。比如泛泰化工公司生產的ms粉,只需要稱取40克,加入1升水,在微波爐中加熱5分鐘,相當簡單。

消毒劑通常是氯化汞(劇毒)。如果不容易得到,可以用漂白粉代替。

調節pH值時,可以用家庭常用的純堿和白醋。

5.培養容器和玻璃器皿:

組織培養的容器要求不是很高,只要玻璃顏色透明即可(鈉玻璃不允許)。

我們可以去垃圾站撿壹些舊果醬瓶。比較好的那瓶是阿香婆辣椒醬,我們實驗室也用。瓶子的密封薄膜可以由聚丙烯塑料制成。如果很難找到,可以用錫箔紙甚至微波爐專用的方便面袋,折疊成兩層,用橡皮筋固定。

其他玻璃器具,如燒杯、玻璃棒等,可以用家庭用的杯子、筷子代替;壹些測量儀器,如量筒、移液管等,最好在玻璃儀器商店購買。恐怕不用花20塊錢就能配置壹套優秀的組培玻璃儀器。

6.其他:

還有壹些用品是必須的。比如妳需要買壹張精密的ph試紙(5.4~7.0),大概需要1.5元。妳不需要買酒精燈。用壹個帶玻璃圈的墨水瓶,外加壹個棉芯。最後用農夫山泉礦泉水的瓶蓋當燈泡。這個酒精燈很小,適合接種箱。刀子、剪刀和鑷子是必要的。去花市的工具攤花10元全部搞定。註意選擇較小的工具。

至於用水,蒸餾水是應該用的,但是我們家裏喝的純凈水比蒸餾水純凈,所以借點飲用水就夠了。我們用康師傅純凈水培養動物細胞,效果都很好,更不用說植物細胞培養了。

以上是組織培養的基本設備和試劑,主要突出其相關替代品,因為作為組織培養中的快繁,其要求相當低。我們的家庭培養不同於工廠化培養,工廠化生產組培苗要追求高增殖率,所以它的要求更加精準和標準。我們的家庭訓練不需要那麽精準,只要達到訓練成功的目的就可以了。當然,要想提高增殖率和試管苗的質量,必須盡量靠近實驗室的器具和設備,替代品總是有壹定缺陷的。

(a)必要的設施和替代品

1,替代

家用冰箱可用於保存培養基母液(4℃)和需要低溫保存的藥物(如生物調節劑)。

高壓鍋:可用於培養基、無菌水、玻璃器皿等組織培養器皿的消毒滅菌。如果使用的水硬度較高,可以用冷開水消毒殺菌。避免消毒物品表面結垢。

不銹鋼鍋或鋁鍋:可用於培養基、溶解瓊脂(作為水浴鍋)、組織培養設備的消毒滅菌。

刷洗廢油桶:可用來儲存蒸餾水。

小白瓷盤:可以用來接種和裝消毒液(如果放了消毒液,就不要再吃了,以免中毒)。

熒光燈:可用於組織培養中補充光源。

洗去廢棄的易拉罐:可用於組織培養,代替錐形瓶和試管。

組織培養地點可以在自己的房間裏進行。配制培養基和接種時,不要在家人多的時候做。如果室內已經安裝了空調,將有利於壹級培養、二級培養甚至幼苗過渡。

2、自制家電

(1)接種盒的制作:潔凈工作臺是組織培養過程中非常有價值的設備。如果用自制的接種盒代替,可以大大節約資金,有利於推廣。

自制接種箱的材料可以是膠合板、纖維板、玻璃(3 mm厚)、木條(裝飾房屋用的龍骨),甚至是紙箱(箱子質量略好,如電視機的箱子),也可以是有機玻璃。

接種盒的大小可以根據他們的家庭條件來定。太小,操作不便,但相對容易消毒,占地少;做壹個大的容易操作,但是消毒工作不容易,而且占地面積大。壹般來說,長70厘米,寬45厘米。50 cm高比較合適。

(2)培養箱的制作:培養箱可代替培養室,也可用於過渡苗。它可以由玻璃或長方形魚缸制成。所以可以用玻璃粘接的方式制作。它的大小可以根據妳家房間的面積和組織培養的量來決定。

3、需要購買設備

普通天平(500g):用於稱量配制培養基藥物,或通過稱量金、銀、中藥稱量配制培養基藥物、微量元素、生物調節劑;或者買微量元素和生物調節劑的時候,買包裝好的。酒精燈1:用於接種時燃燒、消毒、滅菌。漏鬥(也可用於購買瓶裝食用油配送):用於分裝培養基。2長鑷子:用於接種。2把手術刀和幾把刀片:用於接種。10,50,100 ml量筒:用於配制培養基。2長角勺:用於配制培養基和取藥。1,2,5 ml移液器:1用於制備培養基。

耐高溫塑料薄膜或牛皮紙:用於包裹培養瓶口和自制接種盒的邊角。橡膠圈:用於系培養瓶口。脫脂棉:用於操作人員和組織培養設備的酒精棉球消毒。PH (5 ~ 7)試紙1:使用時可剪成小條,檢測培養基的PH值。酒精1瓶:用於酒精燈和消毒。漂白粉1瓶:用於消毒。福爾馬林1瓶:用於接種箱消毒(每次手術前2 ~ 10小時,將10 ~ 20 ml福爾馬林倒入小白瓷皿中,手術前取出)。MS培養基所需的藥物;用於配制培養基。鹽酸和氫氧化鈉:用於調節pH值。如果購買1紫外線燈,室內和接種箱消毒比較理想。

(二)操作註意事項

家庭手術與單位手術不同,要註意以下事項:註意安全,妥善保管藥物。尤其是老人和小孩;操作過程中仔細嚴格消毒。接種時,操作人員應戴口罩和工作帽,避免電風扇和大風沙塵天氣,家屬應避免長時間操作。消毒前後避免家庭寵物進入工作場所;藥品稱量要準確;如果家庭沒有溫度控制(如調溫、空調),盛夏、冬季應避免;紅掌的組織培養應循序漸進。容易培養的花可以先做,難做的花等有了經驗再做。

1.培養容器和玻璃儀器的準備:

準備培養基,首先要準備好培養瓶和準備用的玻璃儀器。培養瓶壹般用各種果醬瓶。首先用洗潔精浸泡瓶子4-8小時,然後用流水沖洗幾次。其他玻璃儀器也需要這樣清洗,直到玻璃壁變成水膜而不是水滴。清洗過的玻璃容器要倒過來,瓶子裏的水要倒空。

幹凈的容器要防塵,盡量放在玻璃櫃裏。用幹凈的毛巾蓋住容器更簡單。

吸液管要吸球清洗,用蒸餾水反復吸,直到幹凈為止。將移液管放在長管中,以便使用。壹般移液器只能用壹次,也就是需要清洗,所以需要準備幾個移液器。建議:10ml/2,5ml/2,1ml/5。

2.培養基的制備:

組織培養的經典培養基是ms配方,基本分為:大量元素、微量元素、鐵鹽、有機化合物、植物激素、糖類和支持物。這些成分的用量都在毫克級別,很難用普通天平稱量。為了解決這個問題,我們可以將各組分的用量按比例放大制成母液,使用時按壹定比例添加。

ms培養基母液的制備方案如下:

常量元素:硝酸銨66.0克;

硝酸鉀76.0克;

無水氯化鈣13.3g;

七水硫酸鎂14.8g;

磷酸二氫鉀6.8克。

將上述物質分別溶解後合並定容至1l,每配制1l取標準ms培養基25ml。

鐵鹽:5.56克七水硫酸亞鐵;

7.46克乙二胺四乙酸二鈉。

將上述兩種分別加熱溶解,混合,定容至65438±0升,調ph至5.5以下,每升MS取5 ml。

微量元素和有機化合物的量太少,為了簡單起見,我們可以用蔬菜提取物或土豆提取物代替。通常我們習慣將100g菠菜用100ml水煮沸10分鐘,過濾保留濾液,每1升ms培養基加入20~50 ml提取液。同理,100克帶皮土豆加200毫升水煮沸15分鐘,過濾濾液,每升ms可加入50~100毫升..

加入上述成分後,每升ms培養基需要30克白糖和7克瓊脂。

這裏應該註意的是糖和瓊脂都是可變的量,應該根據需要進行調整。此外,用於制作果凍的卡拉膠也可以代替瓊脂,透明度更好。

加入上述配料後,體積約為800 ml,用微波爐加熱至瓊脂全部溶解。此時加入所需的植物激素(通常配制0.1%的溶液,因此培養基中每1 ml換算成1ppm)。然後加水至1100毫升的體積(1.1升)。之所以加0.1升,是為了抵消分裝和消毒中的損耗。最後用酸堿調節ph值到5.8~6.0。

3.用ms粉配制培養基:

目前國內壹些化工公司開發了簡易ms培養基粉,大大簡化了培養基的配制,根據不同公司的說明書選擇培養基的類型。我們以ms的原粉為例:ms培養基原粉,包括大量元素、微量元素、鐵鹽、有機化合物、糖、瓊脂,壹般按使用方法稱取,放入微波爐中加熱溶解,加入激素,定容至1100ml(1.1升),調ph值至5.8。

4.子包裝:

將準備好的培養基分裝在培養容器中,註意趁熱分裝,因為瓊脂在40度以下會凝固。每個培養瓶中的培養基約為瓶容積的1/6~1/5,註意不要將培養基掛在瓶外壁上,容易造成汙染。重新包裝後,用聚丙烯薄膜或裝有方便面的袋子封口,用橡膠圈固定(橡膠圈耐熱,盡量選擇自行車內胎)。

5.消毒:

建議買壹些醫療器械商店的“殺菌效果試紙”用於家用高壓鍋的消毒,可以標明殺菌效果,達到殺菌效果會變色。將試紙和培養基同時放入鍋中,加熱至大量蒸汽冒出,加壓切,小火保持30~40分鐘。

滅菌後自然冷卻,取出培養基,置於陰涼無塵處備用。

6.接種箱的準備:

新做的接種箱壹定要幹凈,盡量沒有死角。每次使用前2小時,將操作所需物品全部放入接種箱,然後在小燒杯中加入3-5g高錳酸鉀,放入接種箱。將2-3ml甲醛溶液倒入箱內的燒杯中,幾秒鐘後會出現甲醛蒸氣,使接種箱內所有物品得到第壹次消毒。同時打開紫外線燈進行照射。紫外線燈由高壓穿透汞蒸氣產生,紫外線二次殺菌。紫外線照射約15分鐘後,會激發氧氣形成臭氧,臭氧作為殺菌的第三道防線。經過三次滅菌,接種盒基本可以達到無菌標準。

手術前15分鐘內,將5 ml濃氨水倒入剛才用來蒸發甲醛的燒杯中。因為甲醛對人體有毒,所以氨水可以和甲醛形成壹種叫做“六亞甲基四胺”的固體物質,從而中和甲醛的刺激性蒸汽。此時不要關閉紫外線燈,繼續照射,直到手術前5分鐘關閉,保持黑暗5分鐘,再打開日光燈進行手術。維持黑暗5分鐘的原因是紫外光通過作用於dna的胸腺嘧啶形成四聚體而殺死微生物,但微生物有壹種光復活蛋白,可以在可見光存在下還原胸腺嘧啶四聚體,使微生物復活。這種效應被稱為“光復活”,所以關掉紫外線後需要保持幾分鐘的黑暗,以避免光復活的出現。

如何在家中進行組織培養

準備

由於條件限制,家庭組織培養無法配置大量的營養培養基,壹般每次配置1升為宜。煮沸後用PH試紙測量,分裝成35-40瓶,用棉塞塞住,用包裝紙包好。(棉條做棉衣壹定要用卷棉,不能用脫脂棉,然後用紗布裹緊,用棉線紮緊。棉塞的緊密度應該是便攜式棉塞瓶不會滑動。)然後放入高壓滅菌器高壓滅菌。當蒸汽從高壓釜的噴嘴噴出時,扣上壓力閥,從壓力閥噴出空氣開始計時,持續維持在15-20分鐘,然後關火。壓力消失後,打開鍋蓋,取出營養培養基,放入接種箱備用。在第壹個實驗中,當沒有觀察到黴菌生長時,滅菌的培養基應該放置三到五天才能使用。如果長了黴菌,說明殺菌時間不夠,需要適當增加殺菌時間。

接種疫苗

將滅菌後的培養基、無菌水、消毒劑和用過的設備放入接種箱。由於接種箱內的容積比較小,所有使用過的物品都要有序的擺放在相應的位置,不能隨意擺放。箱內濕度大,必須用打火機代替火柴點燃酒精燈。要特別註意準備裝汙水和汙物的容器,盡可能大,因為操作時不允許從箱子裏拿出東西。將所有物品放好後,將裝有10-20 ml福爾馬林的磁杯放入盒中(最好不要用玻璃杯,因為反應時溫度高,容易爆裂。),倒入2-5g高錳酸鉀(PP粉)使其蒸汽充滿箱體,達到殺菌效果。此時應封閉接種箱的排氣孔和操作孔,避免甲醛蒸氣迅速擴散。箱內蒸汽耗盡後才能開始接種,大概需要5-10小時。

接種時,取下密封在接種箱通風孔和操作孔上的封條,取出磁杯熏蒸,將接種材料送入接種箱,打開紫外燈,15分鐘後關閉紫外燈並打開照明燈,然後開始工作。手術時壹定要樹立無菌觀念,把壹切都當成帶菌,時刻註意預防。工作是由於箱內高溫高濕,手容易出汗,所以每瓶接種後要用酒精擦拭手指,也可以戴指套。另外,操作時要註意防火,因為空間小,壹不小心很容易燙傷手指或者引起酒精火災。打開瓶塞時,將瓶口置於酒精燈上方,用右手無名指和小指捏住棉塞尾部,輕輕拉出棉塞。棉塞不能放在箱子裏的物品上。接種後,在酒精燈和棉塞上燒瓶口,然後輕輕塞在酒精燈的火焰上方,系上包裝紙,用鉛筆標註品種、接種日期和編號,然後重復。

事實上,與clean bench相比,人們在工作中感覺要舒服得多。汙染率也很低,熟練操作後幾乎不產生汙染。接種後,愈傷組織分化、幼苗分化和生長狀態與超凈平臺上接種的無差異。

培養

在家的業余條件下是無法控制栽培條件的,要充分利用自然條件。接種後的培養瓶可放在散射光強的地方,如靠窗的書櫃、書桌等,但應避免陽光直射。壹般在22-28攝氏度的室溫下都能正常生長,不屬於特殊品種,不需要特殊照顧。如果室溫太低,可以用紙板、木條、塑料薄膜做壹個簡易的培養箱,在裏面裝壹兩個15-25瓦的白織燈,既能補充光線又能提高培養溫度。夏天溫度過高的時候,有條件的話可以放在空調房裏。如果沒有空調房,很難降溫,但大部分試管苗都能忍受,不會死。幼苗長大後,放在書櫃或工作臺上,感受自己培育的生機勃勃的小生物,無疑是壹種享受。

培養

當幼苗長到壹定程度時,可以配置壹些生根培養基,轉移培養幼苗生根,等到某個根系長好了,就可以出瓶種植了。瓶外育苗時,壹定要註意以下幾個方面:壹是要適當降低溫度;二是增加濕度;三要嚴格控制雜菌的危害;四是保證種植介質疏松透氣;五是保證適當的采光。我通常用跖骨、鋸末和稻殼作為混合基質。栽完苗,我用百菌清噴根,用塑料薄膜覆蓋。少數幼苗只是簡單地用玻璃覆蓋。大約15天以後,可以去掉覆蓋物,進行正常管理。

其實在家裏進行組織培養並不是壹件很困難的事情。只要動動腦筋,想點辦法,很容易做到。萬事開頭難,方法總比困難多。65438到0974我是某縣烤煙研究所所長,但是原來條件不允許,科研經費很緊張。當初科研經費壹年才3000元。那壹年我做了煙草的花藥單倍體,水稻的花藥培養,柑橘的胚乳培養,黑皮甘蔗的莖尖組織培養,三七的愈傷組織培養,黑結草(石斛)種子的無菌培養,體細胞融合。我們用這種方法做了這件事。當時北京上海的很多研究所都來看過,非常驚訝。他們以為珍貴的組培苗被我們扔得到處都是。令人難以置信的是,他們做不到,但他們能在壹個非常偏僻的山區做到。我說這話的意思不是吹噓自己,而是告訴想從事這個行業的朋友,不要低估自己的能量,也不要迷信權威。只要他們有信心,就會嚴格按照科學規律去做。沒有什麽是不可能的。

家用組織培養基質的選擇及效果評價

選擇合適的培養基是植物組織培養成功的基礎。

選擇合適的培養基主要從以下兩個方面考慮:壹是基礎培養基;二是各種激素的濃度和相對比例。

MS培養基適用於大多數雙子葉植物,B5和N6培養基適用於許多單子葉植物,尤其是N6培養基對小麥、水稻等禾本科植物非常有效,白色培養基適用於根培養。

首先嘗試這些介質進行初步實驗,可以少走彎路,大大;減少時間、人力、物力的消耗。通過壹系列初步測試後,可根據實際情況對部分組件進行小範圍調整。

在進行調整時,可以參考以下情況。第壹,當用壹種化合物作為氮源時,硝酸鹽比銨鹽好,但單獨用硝酸鹽會使培養基的PH向堿性方向漂移。如果同時加入硝酸鹽和少量銨鹽,這種漂移就會被克服。第二,當某些元素供應不足時,培養出來的植物會出現壹些癥狀,可以根據癥狀進行調整。比如氮不足時,培養的組織往往呈現花色苷的顏色(紅色和紫色),愈傷組織內部很難看到導管分子的分化;當氮、鉀或磷不足時,細胞會明顯過度生長,形成壹些非常蓬松甚至透明的愈傷組織;鐵和硫缺乏時,組織會失去綠色,細胞分裂停滯,骨痂出現褐色衰老癥狀;當硼缺乏時,細胞分裂趨於緩慢和過度伸長;當錳或鉬缺乏時,細胞生長受到影響。

培養基中外源激素的作用也會造成培養中的壹些類似情況,所以要仔細分析,不能輕易下結論。

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