目的研究杜仲葉中綠原酸的提取和純化方法。方法采用水提、絮凝脫色、樹脂吸附、重結晶等方法提取純化產品。結果杜仲葉濃縮水提液用1%殼聚糖絮凝除雜，活性炭脫色，得到註射液。註射液用NKA-9樹脂吸附，用50%乙醇解吸，濃縮的粗洗脫液用甲醇重結晶，得到純度≥97%的綠原酸，提取率≥65%。結論優化和改進了杜仲葉中綠原酸的提取和純化方法，為杜仲資源的綜合利用和產業化開發提供了參考。
關鍵詞:綠原酸；摘錄；凈化；杜仲葉
杜仲中綠原酸的提取和純化研究。離開
原華，鄧亮，楊曉？小君，閻誌？郭，吳元？辛
(武漢工程大學化學工程與制藥學院，武漢430073)
目的研究杜仲中綠原酸的最佳提取純化工藝。樹葉。方法水提、1%殼聚糖絮凝、活性炭脫色、NKA？9樹脂吸附、50%乙醇解吸和甲醇重結晶。結果綠原酸提取率為68%，純度為97%。結論優選並改進了杜仲綠原酸的提取純化工藝。葉子被調查了。這有助於綠原酸的工業化生產。
關鍵詞:綠原酸；提取；凈化；杜仲。
杜仲。是我國特有的經濟樹種，其藥用價值壹直備受關註。綠原酸是杜仲的主要有效成分。具有抗菌、抗病毒、利膽、保肝、抗高血壓和清除自由基的作用。2000多年前，在《神農本草經》中被列為中藥上品。近年來研究表明，杜仲葉的主要化學成分與杜仲皮基本相同，杜仲葉中綠原酸含量更豐富，達到幹葉重的1%~5%，因此從原料豐富、價格低廉的杜仲葉中提取綠原酸成為研究熱點[1 ~ 3]。其中，華乾[4]和劉俊海[5]提出的大孔吸附樹脂提取純化方法顯示了壹定的工業化前景，但已報道的樹脂分離效果不壹致，沒有最終產品純度和收率的報道。杜仲葉提取物除綠原酸外，還含有鞣質、蛋白質、多糖等物質。為了獲得高純度的綠原酸，需要在多個步驟中分離和純化提取物。本文在文獻工作的基礎上，圍繞產業化目標，對提取制備工藝進行了改進，通過水提、絮凝脫色、樹脂吸附、重結晶，提取制備了高純度、高收率的綠原酸。
1材料和方法
1.1材料和儀器杜仲葉采自湖北五峰(風幹，粉碎)；乙醇、甲醇、稀鹽酸等主要試劑為分析純；殼聚糖是壹種生化試劑；NKA？9、AB？8、NKA？ⅱ型樹脂(南開大學化工廠)；綠原酸(中國藥品生物制品檢定所)。ZF？I型紫外分析儀(上海顧村光電儀器廠)；安捷倫1100高效液相色譜儀。
1.2提取純化工藝準確稱取杜仲葉10.0 g，用2×120 ml去離子水80℃動態提取150 min，過濾，提取液減壓濃縮至100 ml，濃縮液加入4ml 1%殼聚糖溶液絮凝，過濾。9.將樣品上清液用樹脂吸附，用50%乙醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮得到綠原酸粗品，用甲醇重結晶得到綠原酸純品。提取率≥65%(以杜仲葉中綠原酸含量計)，純度≥97%。
1.3綠原酸含量的測定綠原酸含量的測定根據參考文獻[6，7]進行。
2個結果
2.1提取條件
2.1.1提取溶劑的選擇杜仲葉中的綠原酸壹般用40%的乙醇水溶液提取。使用乙醇水溶液進行提取，不僅增加了溶劑成本，還增加了提取物中的脂溶性成分，給後續處理帶來困難。綠原酸在熱水中具有高溶解度。本文選擇水作為提取溶劑。
2.1.2提取溫度的選擇隨著提取溫度的升高，綠原酸的得率不斷增加，當溫度高於80℃時，綠原酸的得率開始下降。隨著溫度的升高，杜仲葉中其他成分的溶出也在增加，考慮到綠原酸的熱不穩定性，提取溫度控制在80℃以下。
2.1.3提取時間的影響隨著時間的延長，綠原酸的得率逐漸增加，尤其是在50 ~ 150 min內，兩者呈現良好的線性關系，然後逐漸達到壹個提取平衡狀態。
2.1.4提取液pH值的影響在溫度、固液比、提取時間相同的條件下，用稀鹽酸調節提取溶劑的pH值，當pH值為4時，綠原酸的收率較高。因此，綠原酸的最佳提取條件為:杜仲葉每片。是10.0 g，用2×120 ml去離子水在pH=4，溫度80℃下動態提取150 min。
2.2絮凝脫色在中藥提取過程中，常采用水提醇沈的方法，目的是去除提取液中的澱粉、膠質、蛋白質、粘液、果膠、多糖、無機鹽等無效成分。發現水提醇沈法中醇濃度越高，除雜效果越好，但醇沈導致的有效成分損失也增加。此外，水提醇沈工藝還存在乙醇用量大、生產成本高、安全系數低等缺點，有必要對工藝進行改進。絮凝澄清法是在中藥提取液或濃縮提取液中加入絮凝劑，通過吸附架橋和電中和作用去除溶液中的部分物質，從而達到分離純化的目的[8]。通過對絮凝劑種類、濃度、絮凝溫度和酸度的選擇和比較，確定最佳絮凝脫色工藝為:每100 ml濃縮液加入4ml 1%殼聚糖溶液，攪拌，60℃靜置60 min，過濾，濾液用1g活性炭脫色，得到澄清的註射液。
2.3大孔吸附樹脂的選擇結合杜仲葉提取物的特性，本文比較選擇了三種極性大孔吸附樹脂NKA-9、AB-8和NKA-ⅱ。預處理和再生後，進行靜態吸附和解吸實驗。三種不同類型的大孔吸附樹脂對綠原酸溶液(4.8mg·mL-1，10 mL)的吸附量、吸附率、解吸率見表1。
表1三種樹脂對綠原酸的吸附和解吸(略)
由表1可知，三種大孔吸附樹脂對綠原酸的吸附量和吸附率均較高，但AB-8樹脂吸附的綠原酸難以解吸，不適合分離綠原酸。只有NKA-9和NKA-II樹脂是合適。相比較而言，NKA-9樹脂在靜態吸附時具有較高的吸附容量和吸附速率，且易於解吸，對綠原酸具有較好的富集效果。
2.4樹脂對綠原酸的吸附實驗
2.4.1動態吸附曲線將濃度為3.0mg·mL-1的綠原酸溶液加入到裝有200gNKA-9大孔樹脂的玻璃色譜柱中，當流速為2.0mL·min-1時(可表示為BV/h，即每小時流經床層的流動相體積為樹脂床層體積的倍數。結果表明，該樹脂可處理7 ~ 8倍體積的樹脂床。
圖1 NKA-9樹脂對綠原酸的吸附曲線(略)
2.4.2註射液流速對吸附的影響為了進行有效的吸附，必須使固液兩相在樹脂吸附過程中有足夠的接觸時間。當註射流速過高時，樹脂不能吸附綠原酸，導致吸附率下降。註射流量太小，雖然吸附充分，但吸附時間長，效率低。將濃度為3.0mg·mL-1的綠原酸溶液過柱，考察樹脂單位時間的吸附量與不同進樣流速的關系。結果表明，當流速為2.0mL·min-1時，吸附效果最好。參見圖2。
圖2註射液流速對吸附的影響(略)
2.4.3註射液pH值對吸附的影響在不同pH值下進行了吸附實驗。結果表明，綠原酸作為壹種多羥基酚酸，在酸性條件下容易被吸附。由於綠原酸在酸性條件下以分子形式存在，增強了樹脂對綠原酸的吸附；內酯形式的綠原酸在強酸條件下容易水解；在堿性條件下，離子形式的綠原酸不容易被吸附。從圖3可以看出，pH值為3時，吸附效果最好。
2.5樹脂對綠原酸的解吸實驗
2.5.1洗脫劑的選擇化合物被樹脂吸附後，根據吸附的強弱選擇不同的洗脫劑。壹般來說，吸附劑通過分子間分散力與吸附劑相互作用時，吸附力較弱，容易洗脫。而吸附劑和吸附質通過偶極力或氫鍵作用時，吸附力強，不易洗脫。NKA-9大孔樹脂極性強，綠原酸是含有酚羥基的化合物，容易與樹脂形成氫鍵。需要溶解性更強的溶劑來洗脫綠原酸。在本實驗中，選擇不同濃度的乙醇水溶液作為洗脫劑，結果如圖4所示。
圖3註射液pH值對吸附的影響(略)
圖4洗脫液乙醇濃度與解吸率的關系(略)
實驗用不同濃度的乙醇溶液進行洗脫，測定洗脫液中綠原酸的含量，計算解吸率。其中50%和70%的乙醇溶液基本可以洗脫樹脂吸附的綠原酸。對洗脫液的薄層分析表明，70%乙醇溶液雖然解吸率高，但洗脫液中的雜質含量也高，達不到有效成分的分離效果，因此實驗選用50%乙醇溶液作為洗脫液。
2.5.2洗脫曲線的繪制樣品清液吸附後，用50%乙醇溶液洗脫，洗脫流速控制在1.0BV/h/h，收集洗脫液，測定洗脫液中綠原酸的含量，繪制洗脫曲線，如圖5所示。
圖5 NKA-9樹脂洗脫曲線(略)
可以看出，用3倍樹脂床體積的洗脫劑基本可以洗脫綠原酸，且洗脫峰集中。減壓濃縮50%乙醇洗脫液，低溫幹燥，得到綠原酸粗品。
2.6.綠原酸粗品用甲醇重結晶，真空幹燥，得到白色針狀晶體。產物的結構經紅外光譜和核磁共振氫譜分析確證，HPLC測定含量為97.95438±0%。
3結論
本研究對杜仲葉中綠原酸的提取工藝條件進行了優化:杜仲葉用去離子水在80℃下提取65438±050min，提取液經濃縮、絮凝除雜、吸附脫色後得到樣品溶液。樣品溶液經NKA-9大孔樹脂處理得到綠原酸粗品，粗品經重結晶得到含量≥97%的綠原酸，提取率≥65%。杜仲。我國資源豐富，從杜仲中提取綠原酸的工藝條件優化。葉為杜仲的充分綜合利用和產業發展提供了基礎數據。
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