用途:該方法采用高效毛細管電泳測定四味靈芝液中腺苷和鳥苷的含量。
該方法適用於四維靈芝液體。
方法原理:取樣品,離心上清液,加到處理過的大孔吸附樹脂上,依次用水和30%乙醇洗脫,收集30%乙醇部分,水浴蒸幹,殘渣用水定容,搖勻,過0.45μm微孔濾膜,將濾液作為供試品溶液註入高效毛細管電泳儀進行電泳分離,用紫外檢測器檢測腺苷和鳥苷的相應值,進行計算。
試劑:1。乙醇
2.硼砂
3.十二烷基磺酸鈉
儀器設備:1臺儀器
1.1高效毛細管電泳儀
1.2熔融應時毛細管柱(75μm×57cm,有效柱長50cm)
1.3紫外線檢測器
2分離條件
2.1運行緩沖液:20 mol/L硼砂(含30mmol/LSDS,pH 10.0) 95%乙醇= 95.5。
2.2氣動取樣:20psi,15s。
2.3柱溫:20℃
2.4檢測波長:254納米
樣品制備:1。稱量測試樣品。
精確量取20毫升四維靈芝液體。
2.參考儲備溶液的制備
準確稱取適量腺苷和鳥苷,以水為溶劑,配制成濃度為0.1mg/L/L的對照儲備液
3.內標溶液的制備
準確稱取適量磺胺甲惡唑作為內標,以水為溶劑,配制濃度為0.2 mg/L的內標溶液
4.標準溶液的制備
準確吸取0.1,0.3,0.5,0.7,1.0,2.0mL對照儲備液,置於5mL容量瓶中,加入1mL內標,加水至刻度,搖勻,得到系列濃度的標準溶液。
5.測試溶液的制備
取供試品,離心上清液,加到處理過的大孔吸附樹脂柱(1.5×11cm)上,依次用50毫升水和100毫升30%乙醇洗脫,收集30%乙醇,水浴蒸幹,殘渣轉移至5毫升容量瓶中,用水溶解。
註:“精確稱量”是指稱量應精確到所取重量的千分之壹。“精密測量”是指測量體積的精度應滿足國家標準中體積移液管的精度要求。
操作步驟:1。繪制標準曲線。
將上述系列濃度標準溶液註入高效毛細管電泳儀進行電泳分離,用紫外檢測器檢測,檢測波長為254nm。將腺苷和鳥苷的濃度繪制為峰面積與內標峰面積之比的標準曲線,並通過線性回歸獲得回歸方程。
2.試驗品的測定
將上述供試品溶液註入高效毛細管電泳儀進行電泳分離,用紫外檢測器檢測,檢測波長為254nm。記錄腺苷和鳥苷的相應值,並計算它們的含量。