關鍵詞:松花粉；黃酮類化合物；大孔吸附樹脂；凈化
松花粉是馬尾松的幹燥花粉。油松。或者屬於同壹科的幾種植物。具有收斂止血、燥濕斂瘡的功效，可用於外傷出血、濕疹、膿皰瘡、皮膚糜爛、膿水淋漓。松花粉含有黃酮類、多糖、膽堿、脂肪酸、蛋白質、微量元素等成分。國內外臨床證明，松花粉具有抗疲勞、降血糖、抗衰老、抑制前列腺增生、保護肝臟、調節免疫功能、減肥美容等多種藥理作用，被譽為“花粉之王”。本文對松花粉中黃酮類化合物的純化技術進行了深入系統的研究，以期為松花粉的進壹步開發利用提供參考。
1實驗材料
1.1儀器
FA1004N分析天平(上海第二分析儀器廠)；UV765紫外-可見分光光度計(上海精密科學儀器有限公司)；RE-52旋轉蒸發器(上海安亭實驗儀器有限公司)；色譜柱2cm×50cm(金州優勝華博經銷處)；D101大孔樹脂(農藥廠生產)；AB- 8和X-5(天津南開大學化工廠生產)
1.2藥檢
松花粉(購自陜西藥材市場，經生藥學教研室雷國連教授鑒定為松科植物馬尾松的花粉)；蘆丁對照品(購自中國藥品生物制品檢定所，批號:100080-200707)；其他試劑如乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉為分析純，蒸餾水用於實驗。
2總黃酮的測定方法
2.1總黃酮含量測定:NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法。蘆丁標準溶液的濃度Y(mg/mL)與吸光度x的關系為:Y = 4.1164 x-0.0368(R2 = 0.0998)。
2.2黃酮類樣品溶液的制備:取700g松花粉，加65438±00倍的60%乙醇提取兩次，每次65438±0.5h，提取液過濾，減壓回收乙醇，濃縮至無醇味，用水稀釋至5000 ml作為供試品溶液。(總黃酮含量為0.497毫克/毫升)
3提純工藝的研究
3.1大孔樹脂的預處理
清洗色譜柱，防止其他物質汙染樹脂，排幹柱內水，向色譜柱中加入95%乙醇，將新樹脂放入柱內，浸泡24小時，用95%乙醇以2BV/h的流速通過樹脂層，直至1ml和4ml蒸餾水的流出液不呈白色渾濁，再用相同流速的蒸餾水沖洗至無酒精味；用2BV5%HCl以6BV/h的流速通過樹脂層並浸泡4h，然後用相同流速的蒸餾水使流出液PH中性，用2BV2%NaOH以6BV/h的流速通過樹脂層並浸泡4h，再用相同流速的蒸餾水使流出液PH中性。
3.2樹脂篩選
3.2.1不同大孔樹脂對松花粉總黃酮的靜態吸附
準確稱取處理後的三種樹脂各65438±0g，置於帶塞帶磨口的50mL三角瓶中，加入精密量取的試液20mL，在振蕩器上振蕩65438±02h，使其充分吸收，取上層液體65438±0ml，測定總黃酮含量。結果見表1。
3.3不同吸附樹脂對松花粉總黃酮的靜態洗脫性能考察實驗樹脂靜態洗脫
用上壹步總黃酮飽和的樹脂，濾除表面水分，準確加入80%乙醇，在振蕩器上振蕩12h，測定總黃酮含量。結果如表2所示。
從表1和表2可以看出，D-101無論是飽和吸附量還是洗脫率都表現最好，因此選擇D-101大孔吸附樹脂純化松花粉總黃酮。
3.5 D101大孔樹脂純化工藝。
3.5.1樣品流速
將3g經處理的D101樹脂通過濕法填充到柱中，將20 ml四種測試溶液(總黃酮濃度為0.497 mg mL-1)分別與0.5 mL min-1、1.0 mL min-65438混合。
從表3可以看出，樣品的流速控制在1.0 ~ 1.5ml min-1較好。
樣品濃度
向樹脂柱中加入20ml 3種試液，控制流速為1 ml min-1，收集流出液，測量500nm處的吸光度，計算吸附率。結果見表4。
從表4可以看出，三種樣品的樹脂吸附率與濃度有關，濃度越高，吸附率越高。
pH值
取供試品溶液20mL，用1mol·L-1 HCl調節pH值為3、4、5、6、7，控制流速在1ml·min-1吸附，在1ml·min-65438使用50%乙醇。
從表5可以看出，將樣品溶液的PH值調整到5.0-6.0比較好。
樣品裝載
將供試品溶液加入樹脂柱，控制流速1ml min-1進行吸附，在500nm處測定並計算總黃酮含量，繪制D101大孔樹脂的滲漏曲線。見圖1。
從圖1可以看出，當上樣流出液體積為6BV時，大孔樹脂接近飽和。此時樹脂與原料的比例約為1:3。
洗脫液濃度
分別取供試品溶液20mL(總黃酮濃度為0.497mg·mL-1)，以1mL·min-1的流速動態吸附後，以6BV的水以1mL·min-1的流速洗脫。然後以1ml·min-1的流速梯度依次用10%、30%、50%、70%、90%乙醇5BV洗脫，收集洗脫液，測定洗脫液中黃酮類化合物的含量，計算黃酮類化合物的解吸率。結果如表6所示。
從表6可以看出，50%的乙醇解吸效果最好。
2.3.6洗脫速度
以1 ml min-1的流速，分別取四種供試品溶液各20mL進行吸附，分別以0.5 ml min-1、1.0 ml min-1.5 ml的流速，用50%乙醇進行洗脫。
從表7可以看出，洗脫速度為0.5 ~ 1.0 ml min-1。
3.5.7純化松花粉總黃酮純度檢測
從表8可以看出，松花粉總黃酮經大孔樹脂純化後純度可達80%以上，重現性好。
4結論
結果表明，D101大孔吸附樹脂對松花粉黃酮的純化效果較好，吸附率和解析率較高。研究了D101大孔吸附樹脂純化松花粉黃酮過程中，幾種因素對上樣效果和洗脫效果的影響。最終流程如下:樣液濃度為0.358 mg/mL，樣液流速為1 mL/min，用50%乙醇溶液以1 mL/min的速度洗脫3BV。松花粉中總黃酮的純度可達80%以上。
參考
[1]中國保健協會健康專業委員會宣傳部。國珍松花粉的藥理研究與臨床應用[J].健康咨詢師，2005，17: 48-51。
[2]王敏。松花粉成分及藥理作用的研究進展[J].安徽醫學，2008，12 (4): 357-359。
[3]國家藥典委員會。中華人民共和國* * *和國家藥典[M]。第壹部分北京:中國醫學科技出版社，2010:333。
關於作者:
彭秀娟(1981-)，女，山東臨沂人，研究生，講師，研究方向:中藥藥效物質基礎研究。