MTT粉劑和溶液存放時需要避光，用鋁箔包裹即可。實驗過程中，我壹般會關掉超凈臺上的日光燈避光，這樣比較好。
磁帶引頭
步驟如下:
1:細胞的接種:用含10%胎牛血清的培養液制備單細胞懸液，每個孔作為壹個細胞懸液。
將1000-10000個細胞接種到96孔板中，每個板的體積為200ul。
2.培養細胞:與壹般培養條件相同，培養3-5天(培養時間可根據實驗目的和要求確定)。
3.染色:培養3-5天後，MTT溶液(5毫克/毫升，含PBS
繼續孵育4小時，終止培養，並小心丟棄孔中的培養上清液。對於懸浮細胞，離心，然後丟棄孔中的培養上清液。向每個孔中加入150ul DMSO，搖動10分鐘，使晶體完全熔化。
4.比色法:選擇490nm波長，測量酶聯免疫傳感器上各孔的吸光值，記錄結果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪制細胞生長曲線。
註意事項:
(1)選擇合適的細胞接種濃度。
(2)避免血清幹擾:壹般選用胎牛血清小於10%的培養液進行試驗。染色後盡量吸幹孔內殘留的培養液。
(3)設置空白對照:與實驗平行的空白對照，不加細胞，只加培養液。其他測試步驟壹致，最後比色法用空白調零。
MTT測試的吸光度最後應該在0-0.7之間，超過這個範圍就不是線性關系了。
IC50為半抑制率，表示抑制率為50%時的藥物濃度。將藥物稀釋至不同濃度，然後計算各自的抑制率，以藥物濃度為橫坐標，抑制率為縱坐標作圖，得到50%抑制率時的藥物濃度，即為IC50。要點:把藥稀釋兩遍，多做梯度，做點圖！
比如每組的濃度是0.1，0.01，0.001，0.0001，0.00001，稀釋倍數是10，濃度最大。代替
計算公式:
Pm=0.95
Pn=0.06
p = 0.95+0.80+0.65+0.43+0.21+0.06 = 3.1
Xm=lg0.1=-1
lgI = LG 0.1/0.01 = 1
lgic 50 =-1-1 *(3.1-(3-0.95-0.06)/4)=-3.6025
IC50=0.00025
有公式可以參考；
lgIC50=Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4)
Xm:lg最大劑量
I:lg(最大劑量/鄰近劑量)
p:陽性反應率的總和。
Pm:最大陽性反應率
Pn:最小陽性反應率
抑制率=1-給藥組OD值/對照組OD值。
公式中最大和最小陽性反應率為最大和最小抑制率。
示例:
將在96孔板中培養的SMMC-7721肝癌用作MTT來測量細胞活力。1640培養基要加多少，MTT和DMSO加多少合適？根據書中記載，在加入200 UL 1640，20 UL MTT，150 ULD MSO之前，應盡可能去除培養基，以便於D MSO溶解的甲基丙烯酸甲酯顆粒的比色測定。
壹般以每孔4000個細胞為宜，即細胞濃度為20000個細胞/ml，MTT加20ul，4小時後洗去上清液，註意不要洗去指甲，然後每孔加入150ul DMSO，在脫色搖床上搖動10分鐘，然後測吸光度。
壹般應低於IC50，以避免非雕亡細胞過多，流式細胞儀檢測片段過多。我壹般用1/2-1/3的IC50，36h。壹般情況下，空白處理的腫瘤細胞系雕亡率應低於1%，處理後壹般為5-10%(Annexin V)，細胞周期的亞G0峰明顯。