壹.質粒DNA
提取的pQE-31和pUC18-CAT質粒。
第二，重組DNA的制備
1.在已滅菌的1.5mL離心管中，加入pQE-31質粒10ml (2mg/ml)、2mL酶消化緩沖液和1mL BamHI和HindIII酶的BamHI溶液(各含10單位)進行無菌處理。
2.在另壹個無菌1.5mL離心管中，加入20ml puc 18-CAT質粒，加入3mL酶切反應液，lmL BamHI和HindIII酶的混合液，用無菌雙蒸水補足至30mL，37℃反應過夜。
3.反應結束後，取5ml PQE-31質粒的酶切液進行電泳分析，檢查酶切是否完全。酶消化完成，進行下壹步。
4.酶切後的質粒pQE-31和pUC18-CAT分別上樣於瓊脂糖凝膠電泳上(註意加DNA分子量標準)。電泳後，根據試劑盒說明，用DNA瓊脂糖凝膠純化試劑盒回收DNA片段。前者回收的片段為3.5kb，後者為650bp。
5.將回收的pQE-31載體質粒分成兩部分，壹部分與酶切後回收的CAT片段混合並連接；另壹個沒有添加CAT片段進行對比。操作如下所示:
在10mL DNA樣品中，加入T4 DNA連接酶緩沖液1mL，T4 DNA連接酶1mL，14℃(室溫)過夜，然後轉化大腸桿菌。
第三，轉化感受態細胞
1.制備的感受態細胞(保存於-20℃)。
2.融化後，將100mL連接產物加入到冰浴中的感受態細胞中，混合均勻，置於冰上30分鐘。隨後的操作按照實驗1進行。同時比較了用不含CAT片段的空白pQE-31載體質粒轉化的感受態細胞。
實驗結果
過夜培養後，實驗組和對照組的培養皿上都可能出現壹些菌落。如果實驗組的菌落數明顯多於對照組，這是壹個好的跡象，但實驗組的菌落是否含有所需的DNA重組體還需要進壹步鑒定。