(1) 瑞氏染液配制:
瑞氏染料 830gm或1g
甲醇(AR) 500ml或600ml
○先稱幹燥(事先放入溫箱幹燥過夜)瑞氏染料放置乳缽內,用乳棒輕輕敲碎染料成粉末,再行研磨至聽不到研芝麻聲即呈細粉末,加少許甘油或甲醇溶解研磨,使染料在乳缸內顯“壹面鏡”光澤,而無染料粉粒沈著。
○再加較多量甲醇研磨呈壹面鏡光亮,靜置片刻,將上層液體倒入壹清潔儲存瓶內(最好用甲醇空瓶),再加甲醇研磨,重復數次,至乳缽內染料及甲醇用完為止,搖勻,密封瓶口。
○存室溫暗處,儲存愈久,則染料溶解、分解就越好,壹般儲存3個月以上為佳。
(2) 緩沖液:
●緩沖液作用:
○染色對氫離子濃度是十分敏感的,據觀察pH值的改變,可使蛋白質與染料形成的化合物重新離解。
○緩沖液須保持壹定的pH使染色穩定,PBS的pH 壹般在***~6.8,
○偏堿性染料可與緩沖液中酸基起中和作用,偏酸性染料則與緩沖液中的堿基起中和作用,使pH恒定。
●緩沖液配制(pH6.4~6.8,弱酸性):
配方1 : 配方2:
1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml
1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml
H2O(新鮮) 加至1000ml
置室溫黑暗處,瓶口密封,防止黴菌汙染,如有汙染則應報廢。