2.壹般是相對量,所以用△△CT法計算。
3.例子如下:對照組基因A的CT值為20,內參(如β肌動蛋白)的CT值為15。實驗組基因A CT值為18,內參CT值為14。
4.先計算樣本量:δCT = 15-14 = 1。2的1的次方是2。也就是說,實驗組的樣本量是對照組的兩倍。基因A:δCT = 20-18 = 2。2的二次方是4。也就是說,實驗組的A基因量是對照組的4倍。但由於加樣量是2次,所以4位是2=2,最後相對量是2次。
5.幾個註意點:擴增的特異性壹定要確定。只能減去同壹靶標的CT值(放大效率可能不同)。2的某次方只是理論值,實際放大效率低於2。最好不要用賽伯綠。
擴展數據:
PCR原理:
1和PCR技術的基本原理類似於DNA的自然復制過程,其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。
2.PCR由三個基本反應步驟組成:變性-退火-延伸:
(1)模板DNA的變性:將模板DNA加熱到93℃左右壹定時間後,模板DNA的雙鏈DNA或PCR擴增形成的雙鏈DNA解離下來,以便與引物結合,為下壹輪反應做準備;
(2)模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA加熱變性為單鏈後,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;
③引物延伸:利用DNA模板-引物偶聯物,在72℃下,以dNTP為反應原料,靶序列為模板,根據堿基互補配對和半保守復制的原理,在DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下,合成與模板DNA鏈互補的新的半保守復制鏈。完成壹個循環需要2 ~ 4分鐘,待擴增的目的基因在2 ~ 3小時內可擴增百萬倍。
百度百科- PCR反應