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中國藥典和美國藥典中的細菌內毒素檢測法的不同點是什麽?

1、細菌內毒素工作標準品(CSE)

CP:對CSE的用途及效價進行定義“細菌內毒素工作標準品中每1ng細菌內毒素的效價應不小於2EU,不大於50EU”

USP:未提到CSE

2、細菌內毒素檢查用水

CP:與靈敏度為0.03EU/ml或更高靈敏度的鱟試劑在37±1℃條件下24小時不產生凝集反應的滅菌註射用水;

USP:與鱟試劑在限定的靈敏度下不發生反應的滅菌註射用水或其它水。

3、實驗用具的準備

CP:實驗所用器皿需經處理,除去可能存在的外源性內毒素,常用的方法是250℃下幹烤至少1小時,也可用其它確證不幹擾細菌內毒素檢查的適宜方法。

USP:使用經驗證的除熱原程序對所有玻璃器皿和遇熱穩定的材料在熱空氣烘箱中進行除熱原,常用的最低溫度和最少的時間是250℃下30分鐘。

4、內毒素標準品貯備液和標準品溶液的制備

CP:未提到

USP:RSE的效價定為10,000USPEU/支,用5ml鱟試劑檢查用水復溶1支RSE的全部內容物,用漩渦混合器間歇混合30分鐘,並用此原液作系列稀釋,將原液置於冰櫃中保存不超過14天,作以後的稀釋之用,在使用前用漩渦混合器強力混合不少於3分鐘,在作下壹步稀釋前需對前面的稀釋液混合不少於30秒,不要貯存稀釋液,因為沒有數據能證明其不會因為吸附作用而失去活性。

5、供試品溶液的制備

CP:|某些供試品需進行復溶、稀釋或在水性溶液中浸提用LRW復溶或稀釋藥品或抽提醫療器械,某些物質可能更適於用其它水性溶液來溶解、稀釋或抽提。

對於過酸、過堿或本身有緩沖能力的供試品需調節被測溶液(或其稀釋液)的pH值,壹般要求供試品溶液的pH值在6.0-8.0的範圍內。

USP:用LRW復溶或稀釋藥品或抽提醫療器械,某些物質可能更適於用其它水性溶液來溶解、稀釋或抽提。

6、內毒素限值的建立

CP:藥品、生物制品的細菌內毒素限值(L)壹般按以下公式確定:L=K/M

L為供試品的細菌內毒素限值,壹般以EU/ml、EU/mg或EU/U(活性單位)表示;K為人每千克體重每小時最大可接受的內毒素劑量,以EU/(kg·h)表示,註射劑K=5EU/(kg?h)?

放射性藥品註射劑K=2.5EU/(kg·h),鞘內用註射劑K=0.2EU/(kg·h);M為人用每千克體重每小時的最大供試品劑量,以ml/(kg·h)、mg/(kg·h)或U/(kg·h)表示,人均體重按60kg計算,人體表面積按1.62m2計算。

註射時間若不足1小時,按1小時計算。供試品每平方米體表面積劑量乘以0.027即可轉換為每千克體重劑量(M)。

USP:非經腸道藥品的內毒素限值,以劑量定義,等於K/M

除了鞘內給藥以外的任何給藥途徑,K均為5USP-EU/kg,鞘內給藥時,K為0.2USP-EU/kg,對於非鞘內給藥放射性藥品,內毒素限值的計算為175/V,V為以mL為單位的最大推薦劑量

對於鞘內給藥的放射性藥品,其內毒素限值為14/V,對於按以每平方體表面積計算的給藥劑量(通常是抗腫瘤藥品),計算公式為K/M,其中K=5EU/kg,M為(最大劑量/m2/小時×1.80m2)/70kg。

7、靈敏度復核實驗

CP:當最大濃度2.0λ管為陽性,最低濃度0.25λ管均為陰性,陰性對照管為陰性時,實驗方為有效,按下式計算反應終點濃度的幾何平均值,即為鱟試劑靈敏度的測定值(λc):λc=lg-1(ΣX/4)

USP:|濃度最低的標準品溶液的所有重復管均為陰性,實驗方為有效。

用下式計算終點濃度的對數值的平均值,然後再計算該平均值的反對數:終點濃度的幾何平均值=antilog(Σe/f)

Σe是稀釋系列的終點濃度的對數值之和,f為重復管數,反應終點濃度的幾何平均值即為鱟試劑靈敏度的測定值。

8、凝膠法限量實驗:

CP:溶液制備以添加了內毒素的溶液為“供試品溶液’。---USP:為“經稀釋的供試品溶液。

CP:使用稀釋倍數為MVD並且已經排除幹擾的供試品液來制備溶液A和B。----USP;使用稀釋倍數不超過MVD的稀釋液來制備溶液A和B

CP:在復試中,溶液A需做4支平行管,當所有平行管都為陰性時,供試品溶液符合規定

------------USP:在復試中,如果溶液A的兩支平行管均為陰性,供試品溶液符合規定

USP:如果供試品溶液以不超過MVD的某個稀釋倍數稀釋,檢測結果為陽性時,可進壹步稀釋供試品溶液但不能超過MVD,再重新進行試驗。------CP;無規定。

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