(壹)檢驗方法
1．乳糖發酵試驗。以無菌操作采取樣品，采取量及稀釋倍數，依據國家或當地衛生標準要求及樣品汙染情況而定。將待檢樣品接種於乳糖膽鹽發酵管內，接種量在l m J以上者，用雙料乳糖膽鹽發酵管，lm1及1mI以下者，用單料乳糖膽鹽發酵管。每壹稀釋度接種3管，置36±l℃溫箱內，培養24±2小時，如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣，則可報告為大腸菌群陰性；如有產氣者，則按下列程序進行。
2．分離培養。將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上，置36±l℃溫箱內，培養18～24小時，然後取出，觀察菌落形態，並作革蘭氏染色和證實試驗。
3．證實試驗。在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落l～2個進行革蘭氏染色，同時接種乳糖發酵管，置36±1℃ 溫箱內培養24±2小時，觀察產氣情況。凡乳糖管產氣，革
蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌，即可報告為大腸菌群陽性。
4．報告。根據證實為大腸菌群陽性的管數，查MPN檢索表，報告每l 00ml(g)大腸菌群的最可能數。
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(二)培養基
①乳糖膽鹽發酵培基
成分：蛋白腖：20g
豬膽鹽(或牛，羊膽鹽)：5g
乳糖:10g
0．04％溴甲酚紫水溶液: 25m1
蒸餾水: 1 000m1
制法：將蛋白腖、膽鹽及乳糖溶於水中，校正pH，加入指示劑，分裝每管l 0ml，並放入壹個小倒管，高壓滅菌115℃15分鐘。
附註：雙料乳糖膽鹽發酵培基除蒸餾水外，其他成分加倍。
用途：乳糖發酵試驗用。
原理：細菌分解糖類是依靠細菌細胞所產生的各種酶類的作用，細菌產生的分解糖類的酶，隨細菌種類不同而異，可以此來鑒別細菌。
乳糖是雙糖，細菌分解雙糖的酶大多是胞外酶。乳糖被乳糖酶水解成葡萄糖和半乳糖，葡萄糖可直接被細菌利用，而半乳糖則需在細胞內轉化為葡萄糖後再被利用。
糖發酵試驗主要是測定細菌分解糖類以後所產生的酸，以培基pH降低(指示劑變色)作為觀察結果的指標。
大腸桿菌等細菌在酸性環境中，由於甲酸脫氫酶的作用，可使甲酸分解成CO2和H2，在培基中產生大量氣體，進入倒管中，以便觀察。
註：常用於供發酵試驗的各種糖類、醇類和糖苷類(見表3-1)
②伊紅美藍瓊脂培基
成分：蛋白腖 10g
乳糖 10g
磷酸氫二鉀 2g
瓊脂 17g
2％伊紅Y溶液 20ml
0．65％美藍溶液 10ml
蒸餾水 1000ml
pH7.1
制法：將蛋l白腖、磷酸鹽和瓊脂溶解於蒸餾水中，校正pH，分裝於燒瓶內，高壓滅菌121℃15分鐘備用。臨用時加入乳糖，並加熱溶化瓊脂，冷至50壹55℃，加入伊紅和美藍溶液，搖勻，傾註平板。
原理：大腸菌群細菌發酵乳糖產酸，使伊紅與美藍結合而成黑色化合物，故菌落呈黑紫色，有時還可產生金屬光澤。黑色程度與光澤產生情況與伊紅、美藍二者比倒有關。不發酵乳糖的細菌(如沙門氏菌、誌賀氏菌)則為無色菌落。
③乳糖發酵培基
成分：蛋白腖 20g
乳糖 10g
O．04％溴甲酚紫水溶液 25ml
蒸餾水 1000ml
pH7．4
制法：將蛋白腖及乳糖溶於水中，校正pH，加入指示劑，按檢驗要求分裝30ml、10ml或3ml，並放入壹個小倒管，高壓滅菌115℃15分鐘。
附註： ’
(1)雙料乳糖發酵管除蒸餾水外，其他成分加倍。
(2)30ml和10ml乳糖發酵管專供醬油及醬類檢驗用．3ml乳糖發酵管供大腸菌群
證實試驗用。
4．蛋白腖水
成分：蛋白腖(或胰蛋白腖) 20g
氯化鈉 5g
蒸餾水 1 000ml pH7．4