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土壤微生物分離培養用什麽培養基

1、牛肉膏蛋白腖培養基。(分離出各種細菌、放線菌。)

這是壹種應用十分廣泛的天然培養基,其中的牛肉膏為微生物提供碳源、磷酸鹽和維生素,蛋白腖主要提供氮源和維生素,而NaCl提供無機鹽

牛肉膏 0.3g

蛋白腖 1g

氯化鈉 0.5g

瓊脂 2g

自來水 100mL

pH 7.0~7.2

滅菌 1.05kg/cm2,22min

配制具體步驟

1.稱量

按培養基配方比例依次準確地稱取牛肉膏、蛋白腖、NaCl放入燒杯中。牛肉膏常用玻棒挑取,放在小燒杯或表面皿中稱量,用熱水溶化後倒入燒杯。也可放在稱量紙上,稱量後直接放入水中,這時如稍微加熱,牛肉膏便會與稱量紙分離,然後立即取出紙片。蛋白腖很易吸潮,在稱取時動作要迅速。另外,稱藥品時嚴防藥品混雜,壹把牛角匙用於壹種藥品,或稱取壹種藥品後,洗凈、擦幹,再稱取另壹藥品,瓶蓋也不要蓋錯。

2.溶化

在上述燒杯中可先加入少於所需要的水量,用玻棒攪勻,然後,在石棉網上加熱使其溶解。待藥品完全溶解後,補充水分到所需的總體積。如果配制固體培養基,將稱好的瓊脂放入已溶化的藥品中,再加熱溶化,在瓊脂溶化的過程中,需不斷攪拌,以防瓊脂糊底使燒杯破裂。最後補足所失的水分。

3.調pH

在未調pH前,先用精密pH試紙測量培養基的原始pH值,如果pH偏酸,用滴管向培養基中逐滴加入1mol/L NaOH,邊加邊攪拌,並隨時用pH試紙測其pH值,直至pH達7.6。反之,則用1mol/L HCl進行調節。註意pH值不要調過頭,以避免回調,否則,將會影響培養基內各離子的濃度。

對於有些要求pH值較精確的微生物,其pH的調節可用酸度計進行(使用方法,可參考有關說明書)。

4.過濾

趁熱用濾紙或多層紗布過濾,以利結果的觀察。壹般無特殊要求的情況下,這壹步可以省去(本實驗無需過濾)。

5.分裝

按實驗要求,可將配制的培養基分裝入試管內或三角燒瓶內。分裝裝置見圖Ⅴ-1。

分裝過程中註意不要使培養基沾在管口或瓶口上,以免沾汙棉塞而引起汙染。

(1)液體分裝分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。

(2)固體分裝分裝試管,其裝量不超過管高的1/5,滅菌後制成斜面,如圖Ⅴ-2。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的壹半為宜。

(3)半固體分裝試管壹般以試管高度的1/3為宜,滅菌後垂直待凝。

6.加塞

培養基分裝完畢後,在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物進入培養基內而造成汙染,並保證有良好的通氣性能(棉塞制作方法附本實驗後面)。

7.包紮

加塞後,將全部試管用麻繩捆紮好,再在棉塞外包壹層牛皮紙,以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞,其外再用壹道麻繩紮好。用記號筆註明培養基名稱、組別、日期。三角燒瓶加塞後,外包牛皮紙,用麻繩以活結形式紮好,使用時容易解開,同樣用記號筆註明培養基名稱、組別、日期。

8.滅菌

將上述培養基以1.05kg/cm2(15磅/英寸2),121.3℃, 20分鐘高壓蒸汽滅菌。如因特殊情況不能及時滅菌,則應放入冰箱內暫存。

9.擱置斜面

將滅菌的試管培養基冷至50℃左右,將試管棉塞端擱在玻棒上,擱置的斜面長度以不超過試管總長的壹半為宜。

10.無菌檢查

將滅菌的培養基放入37℃的溫室中培養24—48小時,以檢查滅菌是否徹底。

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