1，稱重
使用準確度為1/100的電子天平稱量培養基所需的藥物。首先根據配方計算出配制壹定量培養基所需的各組分藥物的量，然後用天平準確稱量。稱量時，將稱量紙折成簸箕狀，盛藥。稱量紙的折疊方法。
融化
將培養基放入燒杯或瓷罐中，慢慢加入少量水，邊加邊用玻璃棒攪拌。如果培養基不含瓊脂，培養基不需要加熱；如果含有瓊脂，需要用本生燈或電磁爐加熱煮沸。完全溶解後，應補充所需的水，並攪拌均勻。如果準備了大量的培養基，可以用不銹鋼鍋加熱融化。壹是可以用溫水加熱，隨時攪拌，防止結焦。如果有結焦，配制的培養基不能使用，需要重新配制。
配制培養基時，不允許在銅或鐵容器中融化，因為銅或鐵容器可能使培養基中銅、鐵含量超標，影響實驗(培養基中銅含量大於0.3mg/L，不適合細菌生長，鐵含量大於0.14mg/L，會阻礙細菌產生毒素)。易發生反應和沈澱的藥物要單獨溶解，最後加入培養基中，如磷酸二氫鉀、硫酸鎂等。
3.調節pH值
雖然培養基中含有緩沖物質，可以使培養基的pH值盡可能保持在要求的範圍內，但如果配制的培養基不符合要求，就必須進行必要的調整。如果有經過校準的酸度計，可以使用酸度計。
如果沒有，使用精密的pH試紙，然後根據需要用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸調節所需的pH值(可以用0.1mol/L氫氧化鈉或0.1mol/L鹽酸進行微調)。
培養基的pH值壹般為7.4~7.6，也有酸性或堿性。用氫氧化鈉調節需要高壓滅菌的培養基的pH值時，應調節到比要求高0.1 ~0.2個單位，因為高壓滅菌後培養基的pH值會降低0.1~0.2。如果培養基含有碳酸鈣，可以調節pH值。
第四步:過濾
如果對配制的培養基沒有特殊要求，可以省略這壹步。如果有沈澱或渾濁需要澄清，可用濾紙過濾液體培養基。固體培養基可以用雙層紗布過濾，中間有壹層薄薄的脫脂棉。
若過濾法不能滿足澄清要求，可采用蛋清澄清法，即將培養基加熱冷卻至50℃~60℃，裝入三角瓶中(不超過容量的壹半)，按1000ml加入1 ~2個蛋清，劇烈搖動3min~5min，高壓蒸汽滅菌1265438+。
5、包裝
將配制好的培養基根據不同用途分裝在三角瓶、試管等容器中，試管分開包裝。如果試管很大，可以使用自動液體分離器。
如果試管數量少，可以用漏鬥包裝。重新包裝的數量不得超過容器容積的三分之二。三角瓶不要超過容積的壹半；瓊脂斜面不得超過試管長度的五分之壹，滅菌後斜面應為培養基的三分之壹，底層的三分之二。半固體瓊脂的量為試管長度的三分之壹。
用於接種或菌種保藏的高級瓊脂，分裝量為試管長度的四分之壹或三分之壹，用於接種厭氧菌的量應達到三分之二；瓊脂平板，90mm內徑為13ml~15ml，70mm內徑為8ml~10ml。
如果表面有大量水分，可將平板倒置，放入37℃的培養箱中30min，晾幹後使用。每批培養基中單獨包裝壹個小玻璃瓶(約20ml)，與該批培養基同時滅菌，以測定該批培養基的最終pH值。
6、殺菌
分裝後的培養基應立即滅菌。
7.倒置板
滅菌溶解後的培養基冷卻至50℃左右後，倒入無菌幹燥的培養皿中。培養基的溫度不能太高，否則容易在培養皿內蓋上形成過多的冷凝水；溫度太低，培養基容易凝固成塊，不能做成平板。
倒平板時，應靠近酒精燈的火焰進行，以免異物雜菌進入平板。左手握住培養皿，右手握住三角瓶的底部，用左手的小指和手掌拔下三角瓶的棉塞，灼燒瓶口，用拇指和食指打開培養皿的蓋子，直至瓶口剛好伸入，倒入培養基，以蓋住底部為限，不超過培養皿高度的三分之壹，並迅速蓋好，放在桌上。
8.擺動斜面
滅菌後，試管中的瓊脂培養基立即趁熱放在木棒(或玻璃棒)上，適時完成梯度。冷卻後，瓊脂凝固成斜面。斜面的長度不應超過試管的壹半。
9、質量檢驗
培養基滅菌後，應仔細檢查。如發現有裂紋、浸水、顏色異常、被介質汙染的棉塞，應報廢，不能再次使用。並測定其最終pH值。
還需要進行無菌檢查和效果檢查。無菌檢查是取1管(瓶)~2管(瓶)無菌培養基，37℃培養1d~2d，確保無雜菌生長；效果檢驗是將標準菌株接種在相關培養基上，檢查菌株的生長、形態和生化，與已知情況壹致。兩個條件都合格，配好的培養基就可以用了。