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商業化產品貨架期的估計

貨架期被認為是關鍵性因素,它決定生防制劑的商業化是否成功,就像田間防效壹樣(Feng et al.,1994)。如果制劑貨架期能達到18個月,且存活率降低很小,那麽就有很好的農業市場(Couch et al.,1981),因為濕度和溫度的強烈影響,這壹點很難做到。人們廣泛應用高溫、高濕下樣品的穩定性來快速評價食品和藥品的貯藏期(Labuza et al.,1985)。這樣,幾天或幾周內就有可能收集到數據,而不耽誤時間(如幾個月),在實際貯藏條件下進行長時間的貨架期估價是必需的。用溫度轉換模型,將加速實驗所獲得的數據轉換為貯藏條件下的真實時間(實際時間),例如Q10或Arrhenius方程的活化能(Ea)(Saguy et al.,1980)。然而,在加速實驗得出錯誤的結論前,許多實踐和理論錯誤是可以避免的(Franks,1994)。以下是Labuza等(1983)建立的模擬估測貨架期與商品品質損失的數學模型。

12.5.5.1 貨架期與商品品質的數學模型

有個基本假設:有壹組參數影響產品的質量(Q)(實驗中為存活率),這是可以測量的。進壹步的定量分析需要質量變化時間與壹些因子之間的關系,通常用以下方程表示:

木黴生物學

各因子是隨時間變化的。例如,溫度壹般是生物樣品穩定性的主要因子;濕度的影響,以及其他影響反應速率的重要參數已經根據水活性進行了說明。現在,這種方法很好地應用於預測食品和藥品的穩定性上(Labuza et al.,1983),既然樣品貯存期間質量的改變完全起源於化學反應,那麽最簡單和最常用的經驗模式如下:

木黴生物學

式(12.1)中,k為速率常數;n為反應級數(食品或藥品通常為0或1)。這個公式完全忽略了機械的參與,實際生產中,在適當的坐標系中(如壹級反應的半對數圖),參數Q被設計成隨時間而變化,用普通的統計學方法來評價裝置是否好(高的r2)。壹般來說,完成超過50%的反應所產生數據,就可給出明確的n值(Labuza et al.,1983)。

假定速率常數k受濕度和溫度影響。最普通的Arrhenius方程用數學模型來描述k對T的依賴性:

k=k0exp(-Ea/RT) (12.3)

該公式中,k0為指前因子;R為理想氣體常數;Ea為活化能。如果ln(k)對T-1的圖譜為直線,那麽Arrhenius方程可適用,活化能在溫度範圍之外時為常數。確定它們之間的線性關系至少需要四個溫度數據,當超出壹定的反應溫度時,直線出現了偏差。在低濕度情況下,產品不可能出現玻璃態,這時更適用於用Williams-Landel-Ferry(WLF)方程來描述隨溫度的變化:

Log(kref/k)=[-C1(T-Tref)]/[C2+(T-Tref)] (12.4)

公式中,C1和C2是常數,他們依賴於原料;Tref是參考溫度,壹般指玻璃化轉變溫度(玻璃化溫度)。根據水活度概念,已經很好地建立了濕度對產品穩定性的影響(Karel,1975)。第壹步就是要檢測速率常數和水活度之間的線性關系:

lnk=aaw (12.5)

這需要進壹步了解含水量,m(每千克幹孢子中含水量)及水活度(at constant T)之間的關系,即所謂的吸附等溫線。而且,該等溫線最普遍應用的公式如下:

m=(moKCVaw)/{(1-Kaw)[1+K(C-1)aw]} (12.6)

將公式(12.3)和(12.5)進行合並,得出速率常數k對溫度和水活度的依賴關系:

ln k=a1+β/T+γaw+δaw/T (12.7)

該公式中,a,β,γ,δ都是常數,可通過統計方法如非線性回歸等確定。

12.5.5.2 數學模型的應用

Pedreschi等(1997)制備了兩種類型的哈茨木黴T.harzianum P1 孢子進行貨架期實驗:M1為28℃培養60h,M2為相同培養條件後在40℃熱休克處理90min。兩種樣品均先經玻璃棉過濾除去菌絲後用賽多利斯Sartorius硝酸纖維素膜(1.2 um孔徑)過濾得到孢子泥。該固形物在放有矽膠幹燥劑(aw=0.03)得幹燥器中幹燥3 d,檢測絕對存活率。絕對存活率(AV)通過比較菌落形成單位(CFU)的數量與總孢子數(TS)來確定。

測絕對存活率。絕對存活率(AV)通過比較菌落形成單位(CFU)的數量與總孢子數(TS)來確定。

相對存活率(V)定義為:

木黴生物學

公式中AVt為經過時間t後幹燥孢子的絕對存活率;AV0為幹燥後孢子的絕對存活率。

木黴生物學

其中,a= [ -1],β= [1- ],ε= ;kb,c為方程式常數;m0為單層值。

用來描述相對存活率(V)與時間關系的壹階動力學方程式如下:

lnV=4.61-kt (12.10)

相對存活率V0在存儲周期的開始為100,ln(100)=4.61。

k與T和aw的依賴性關系符合阿雷尼厄斯型Arrhenius半經驗模型,動力學方程式如下:

木黴生物學

實驗結果表明,M1和M2經過緩慢試驗均表現出較高的存活率(55%)和相似的海藻糖含量(分別為4.0%和5.4%)。在不同溫度 T(8℃,33℃和42℃)和水活度 aw(0.03,0.33和0.75)下儲存110d 後,各組存活率均未被觀察到顯著差異。aw=0.03時,8℃和33℃下的孢子存活率分別為100%和70%。在aw=0.75及42℃下,海藻糖含量和孢子存活率降低最快。熱休克的M2 處理在8℃條件下52d的孢子存活率為100%,而且海藻糖的含量也比M1處理略高。

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