飼料粗蛋白的檢測方法（凱氏半微量定氮法）
1 原理
凱氏法測定試樣含氮量，即在催化劑存在下，用濃硫酸破壞有機物，使含氮物轉化成硫酸銨，加入強堿（NaOH）並蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收後，用標準鹽酸溶液滴定測出含氮量，將結果乘以換算系數6.25，計算出粗蛋白質含量。
2 儀器設備
2.1實驗室用樣品粉碎機或研缽
2.2分樣篩：孔徑0.45mm（40目）
2.3分析天平：感量0.0001g
2.4消煮爐或電爐
2.5滴定管：酸式25mL
2.6凱氏燒瓶：100mL
2.7凱氏蒸餾裝置：半微量水蒸汽蒸餾式
2.8錐形瓶：150mL
2.9容量瓶：100mL
3 試劑
3.1硫酸：分析純
3.2硫酸銅：分析純
3.3硫酸鉀：分析純
3.4硒粉：分析純
3.5氫氧化鈉：分析純40g溶於100mL蒸餾水配成40%水溶液。
3.6硼酸：分析純2g溶於100mL蒸餾水配成2%水溶液。
3.7混合指示劑：甲基紅分析純0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠分析純0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，陰涼處保存期三個月以內。
3.8 0.02N鹽酸標準溶液：1.67mL鹽酸分析純溶於1000mL 蒸餾水中。
3.8.10.02N鹽酸標準溶液的標定（碳酸鈉法）
精確稱取0.04g於270—300°C灼燒至恒重的基準級無水碳酸鈉，準確至0.0001g，無損失地轉入100 mL三角瓶中，加入無CO2蒸餾水(新做蒸餾水或蒸餾水煮沸數分鐘放涼後使用)50mL溶解，並加入混合指示劑10滴，用鹽酸標準溶液滴定至溶液由綠色變為暗紅色，煮沸2分鐘，冷卻後繼續滴定至溶液呈暗紅色，同時做空白試驗。
3.8.2鹽酸標準溶液當量濃度的計算
G
N =
(V1-V2)×0.05299
式中：G——無水碳酸鈉的重量，g；
V1——鹽酸標準溶液消耗的體積，mL；
V2——空白試驗所消耗鹽酸標準溶液的體積，mL；
0．05299——每毫克當量碳酸鈉的克數；
註：標定各濃度間的相對偏差不大於0.2%。
3.9蔗糖：分析純
3.10硫酸銨：分析純，幹燥。
4 試樣的選取與制備
選取具有代表性的試樣用四分法縮減至200g，粉碎後全部通過40目篩，裝於密封容器中，防止試樣成分變化。
5 測定方法及步驟
5.1試樣的消煮
稱取0.5—1g試樣 （粗蛋白含量在25%以下稱取1g，粗蛋白含量在25%以上稱取0.5g），準確至0.0002g，放入凱氏燒瓶中，加入硫酸銅0.4g，無水硫酸鉀6g，硒粉0.004g，與試樣混合，再加濃硫酸12.5mL，在消煮爐上小心加熱，待樣品焦化，泡沫消失，加強火力，至溶液澄清後，再加熱至少1h。
5.2氨的蒸餾（半微量水蒸汽蒸餾法）
將上述消煮液冷卻，無損失地轉入100 mL容量瓶中，冷卻後定容為試樣分解液，取20 mL 2%硼酸溶液，加混合指示劑2滴，使半微量蒸餾裝置的末端浸入此溶液，準確移取試樣分解液10 mL註入反應室中，塞好入口玻璃塞，再加入10mL 40%NaoH溶液，小心提起玻璃塞使之流入反應室（加堿時流速不可過快，否則會引起硼酸吸收液倒流），塞好玻璃塞，並在入口處加水密封好，防止漏氣，蒸餾，自吸收液變為藍色開始計時，4分鐘後，使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾1分鐘，用蒸餾水洗凈冷凝管末端，洗液均流入吸收液。
5.3滴定
吸收氨後的吸收液立即用0.02mol/L的標準溶液滴定，溶液由藍色變成灰紅色為終點，記錄所耗標準溶液的體積。
5.4空白測定
稱取蔗糖0.5g代替試樣，重復上述操做，以校正藥品不純所發生的誤差，消耗0.02mol/LHCL應不超過0.3mL。
6 測定結果的計算與分析
6.1計算公式如下：
（V-V0）×(N×0.014×6.25) ×100
粗蛋白（%）=
W×V/V′
式中：V-----滴定試樣時所需酸標準溶液體積，mL；
V0------滴定空白時所需酸標準溶液體積，mL；
N-------鹽酸標準溶液當量濃度；
W------試樣重量，g；
V-------試樣分解液總體積，mL；
V′------試樣分解液蒸餾用體積，mL；
0.0140------氮的毫克當量數；
6.25-----氮換算成蛋白質的平均系數。
6.2重復性
每個試樣取兩個平行樣，以其算數平均值為結果；
粗蛋白含量在25%以上，允許相對偏差為1%；粗蛋白含量在10-25%之間，允許相對偏差為2%；粗蛋白含量在10%以下，允許相對偏差為3%；
7 測定步驟的檢驗
精確稱取0.2g硫酸銨，代替試樣，按上述步驟操作，按上述公式計算（不乘系數6.25），測得硫酸銨含氮量為21.19±0.2%，否則應檢查加堿，蒸餾和滴定各步驟是否正確。
8 註意事項
8.1試樣消煮時，先低溫加熱，避免泡沫溢出，待泡沫消失後，再逐漸增加溫度，使之微沸，避免劇烈沸騰，否則會使氮分子損失。
8.2加堿必須過量，堿除了與銨鹽和剩余的硫酸作用，還與硫酸銅作用生成藍色氫氧化銅，然後分解為黑色氧化銅。
8.3消化過程中，若硫酸損失過多，可酌量補加硫酸，勿使瓶內幹涸。