實驗12:DNA的粗提取和鑒定
[日期:2007-12-14]來源:桂林中學校園網作者:毛敏[字體:大中小]
實驗12:DNA的粗提取和鑒定
實驗原理
DNA在氯化鈉溶液中的溶解度隨氧化鈉的濃度而變化。氯化鈉濃度為2 mol/L時，DNA的溶解度最大，濃度為0.1.4 mol/L時，DNA的溶解度最低。利用這個原理，溶解在氯化鈉溶液中的DNA可以被分離出來。
DNA不溶於95%的酒精溶液，但細胞中的壹些物質可以溶於酒精溶液。利用這個原理，可以進壹步提取雜質較少的DNA。
DNA中含有脫氧核糖，能與二苯胺(沸水浴)反應生成藍色物質。因此，二苯胺可以作為識別DNA的試劑。
目的要求
1.學習粗DNA的提取和鑒定方法。
2.觀察提取的DNA的顏色和形狀。
材料和器具
配料:活雞或雞血。
儀器:離心機、恒溫水罐、載玻片、玻璃棒、濾紙、滴管、量具(100 mL，L件)、燒杯(100 mL，L件，50 mL、500 mL，各2件)、試管(20 mL，2件)、漏鬥、試管夾。
試劑:95%乙醇溶液(實驗前在冰箱中冷卻24 h)，蒸餾水，0.1g/ml檸檬酸鈉溶液，2 mol/l氯化鈉溶液，0.015mol/l二苯胺試劑。
方法步驟
實驗前，需要準備好雞血細胞溶液(由老師完成)。制備方法是:取質量濃度為0.1 g/ml的檸檬酸鈉溶液(抗凝劑)100 mL，置於500 mL燒杯中。將宰殺後的活雞的雞血(約180 mL)註入燒杯中，同時用玻璃棒攪拌，使血液與檸檬酸鈉溶液充分混合，避免凝固。然後，將血液倒入離心管，以1000 r/min離心。2min，此時，血細胞沈澱在離心管底部。實驗過程中，血漿用吸管吸走。雞血細胞液可以從心臟管的上清液中獲得。
1.提取雞血細胞的核物質。
將5 ml ~ 10 ml配制好的雞血細胞溶液註入50 mL燒杯中。在燒杯中加入20 mL蒸餾水，同時用玻璃棒充分攪拌5 min，以加速血細胞的破裂。然後，用裝有紗布的漏鬥將血細胞液過濾至500mL。取其濾液。
2.溶解細胞核中的DNA
向濾液中加入40mL濃度為2 mol的氯化鈉溶液，搖動燒杯使其混合均勻。此時，DNA溶解在溶液中。
3.沈澱含有DNA的粘性物質
沿著燒杯內壁慢慢加入蒸餾水，同時用玻璃棒輕輕攪拌。此時燒杯中出現絲狀物，註意觀察絲狀物是什麽顏色。繼續加入蒸餾水，溶液中會出現越來越多的粘稠物質。粘度不再增加時停止加入蒸餾水(此時溶液中氯化鈉的濃度相當於0.1.4 mol/L)。
4.過濾掉含有DNA的粘性物質
使用帶有多層紗布的漏鬥，將步驟3中的溶液過濾到500mL燒杯中，含有DNA的塗料留在紗布上。
5.再次溶解DNA的粘性物質
取1個50毫升燒杯，向燒杯中註入20毫升2摩爾/升的氯化鈉溶液。用鈍鑷子將紗布上的粘性物質夾入氯化鈉溶液中，用玻璃不斷攪拌，使粘性物質盡可能溶解在溶液中。
6.過濾含有DNA的氯化鈉溶液。
取100 mL的1燒杯，用帶兩層紗布的漏鬥過濾步驟5中的溶液。取濾液，將DNA溶解在濾液中。
7.提取雜質少的DNA
向上述過濾後的溶液中加入50毫升乙醇體積分數為95%的冷卻溶液(使用冷卻的乙醇對DNA有較好的凝集作用)並用玻璃棒攪拌，溶液中會出現雜質較少的細絲。用玻璃棒把絲卷起來，用濾紙吸幹上面的水。這種細絲的主要成分是DNA。註意絲綢是什麽顏色。
8.8的鑒定。脫氧核糖核酸
取兩支20 mL試管，每支試管中加入5 mL濃度為0.01.5 mol/L的氯化鈉溶液。將蠶絲放入其中壹個試管中，用玻璃棒攪拌，使蠶絲溶解。然後，在兩個試管中各加入4 ml二苯胺試劑。混合均勻後，將試管放入沸水中加熱5 min。試管冷卻後，觀察並比較兩個試管中溶液的顏色變化。在實驗報告本上填寫觀察結果。
結論
步驟8中兩個試管中溶液的顏色變化說明了什麽？在實驗報告本上填寫結論。