1、反應溫度37℃±1℃，時間60min±2min。反應時間和溫度必須嚴格控制，否則會導致錯誤結論。如果反應溫度或反應時間不夠會-----，出現假陽性；同時反應溫度或反應時間超出藥典規定會-----，出現假陰性。
2.藥典規定，試驗應在 10,000 級環境中的 100 級區域內進行。但對受檢試驗室的溫度要求沒有明確規定，而是從《中國藥典》第三十條第四項規定：除另有規定外應以25℃±2℃為準。
我個人認為，檢驗環境沒有必要控制在萬級局部百級區，因為這種環境容易汙染內毒素（理由：以前檢驗內毒素汙染的溶液揮發後容易被風吹出）。但實驗室的溫度最好控制在20℃以下，這是酶促反應，溫度對其影響比較大。
3、試液的pH值、離子濃度、鱟試劑的敏感性以及操作者的操作水平等因素都會影響檢測結果。
因此，2015版《中國藥典》開始對 "細菌內毒素試驗 "做了較大的改動：
1）做 "鱟試劑敏感性復核 "試驗。該試驗的目的不僅是考察鱟試劑的靈敏度是否準確，還要考察檢驗人員的操作方法是否正確，實驗條件是否符合規定；
②"幹擾試驗"，當壹種新藥制定的 "質量標準 "還是生產企業的 "質量標準"。"當新藥制定 "質量標準 "或生產企業原料來源、劑型和生產工藝發生變化時應做 "幹擾試驗"；消除幹擾的方法有BET水稀釋法或加酸加堿調節pH值法消除幹擾。其目的是確認供試品在供試濃度和供試條件下對鱟試劑和細菌內毒素反應無幹擾。
3.通常做 "細菌內毒素試驗 "的試管分別為：供試品 2 管；PPC 2 管；陽性對照 2 管；陰性對照 2 管。並規定陽性對照管、PPC 管均為陽性、陰性對照管均為陰性時，實驗才算有效。否則，實驗結果無效。
原因：如果陽性對照管不是陽性，=====，出現問題的原因很可能是在 "配制細菌內毒素標準溶液 "的第壹步，內毒素標準品或工作標準品加BET水重溶是非常關鍵的壹步，必須按照藥典操作，既加BET水後在振蕩器上振蕩15min。振蕩器上振蕩15min，否則內毒素混合不均勻就會出現此清彼濁的狀況；二是更換不同批次或不同廠家的鱟試劑或BET水時，壹定要做鱟試劑的藥敏復核試驗，否則不知該批次鱟試劑的藥敏和復核水是否符合要求。
--------，陰性對照管不是陰性說明BET水被汙染。
---------PPC管應顯示陽性，不顯示陽性說明被檢物或稀釋後的被檢物在此試驗條件下幹擾了試驗。
如對細菌內毒素檢驗感興趣，可通過 "百度 "搜索筆者近年來在《中國藥師》、《中國醫藥工業》、《海峽藥學》等專業雜誌上發表的有關細菌內毒素檢驗的文章。細菌內毒素檢驗方法的探討》、《吡拉西坦細菌內毒素檢驗方法的建立》、《長春新堿葡萄糖註射液細菌內毒素檢驗方法的研究》、《地塞米松磷酸鈉原料藥細菌內毒素檢驗方法的建立》、《利巴韋林細菌內毒素檢驗方法的建立》、《維生素C註射液細菌內毒素檢驗中的幹擾問題》等論文，加深對問題的認識。