醫院消毒效果監測應遵循以下原則：監測人員應經過專業培訓，掌握壹定的消毒知識，具備熟練的檢查技能；選擇合理的采樣時間（消毒後、使用前）；嚴格無菌操作。
20.2熱力滅菌效果監測方法
20.2.1壓力蒸汽滅菌效果監測方法
20.2.1 化學監測法
（1）化學指示卡（管）監測法：將既能指示溫度又能指示持續時間的化學指示管（卡）置於每個待滅菌物品包的中央，經過壹個滅菌周期後，取出指示管（卡），根據其顏色和性質的變化判斷是否符合滅菌條件。
（2）化學指示帶監測法：將化學指示帶粘貼在每包待滅菌物品的外面，經過壹個滅菌周期後，觀察其顏色的變化來指示滅菌過程是否進行。
（3）結果判定：經檢測，所貼指示筒（卡）的性質或顏色均改變到規定條件時，可認為該包裝滅菌合格。
（4）註意事項：用於監測的化學指示劑必須經衛生部批準，並在有效期內使用。
20.2.1.2生物監測方法
（1）指標菌株：指標菌株為嗜熱脂肪桿菌（ATCC7953或SSIK31菌株），菌片含菌量為5.0X105-5.0x106cfu/片，在121℃±0.5℃條件下，D值為13-1.9min，殺滅時間（KT值）≤19min，存活時間（ST值）≥3.9min。
（2）培養基：試驗所用培養基為溴甲酚紫蛋白腖水培養基。
（3）檢測方法：將兩片嗜熱嗜脂芽孢桿菌裝入滅菌小紙袋中，置於標準試劑盒中央。
滅菌櫃室內，排氣口上方放置壹個標準檢測包（由3件普通長袖手術衣、4塊小手術巾、2塊中手術巾、1塊大手術中3O塊10cm×10cm8層紗布敷料包裹成25cm×30cm×30cm大小）。便攜式壓力蒸汽滅菌器用通風儲物盒（22cm×13cm×6cm）代替標準檢驗包，盒內裝滿中型試管，指示菌片放置在兩支滅菌試管的中心部位（試管口用滅菌牛皮紙包裹密封），儲物盒平放於便攜式壓力蒸汽滅菌器底部。
滅菌壹個周期後，在無菌條件下，取出標準檢驗包裝或曝氣貯存盒中的指示菌片，投人溴甲酚紫蛋白腖水培養基中，56℃培養7天（自帶生物指示劑按說明書執行），觀察培養基顏色變化。試驗設陰性對照和陽性對照。
（4）結果判定：每塊指示劑接種溴甲酚紫蛋白腖水培養基不變色，判為滅菌；指示劑接種溴甲酚紫蛋白腖水培養基，由紫色變為黃色，則滅菌不合格。
（5）註意：用於監測的菌片必須經衛生部批準，並在有效期內使用。
20 .2.2 幹熱滅菌效果監測方法
20.2.2.1 化學檢測法
（1）檢測方法：將既能指示溫度又能指示溫度持續時間的化學指示劑分別放入待滅菌物品中。經過壹個滅菌周期後，取出化學指示劑，根據其顏色和性質的變化判斷是否達到滅菌條件。
（2）結果判斷：試驗中，放置指示劑的試管的顏色和性質均改變到當前條件下，即可認為包裝達到滅菌條件。
（3）註意事項：試驗中使用的化學指示劑需經衛生部批準，並在有效期內使用。
20.2.2.2物理檢測方法：（熱電偶檢測法）
（l）檢測方法：檢測時，將多點溫度檢測器的多個探頭分別置於滅菌器的層、內、外各點。關閉櫃門；將導線引出，由記錄儀觀察溫度上升情況和持續時間。
（2）結果判定：若所示溫度（曲線）達到預定溫度，則滅菌溫度合格。
20.2.2.3生物測定：
（1）指示菌株：枯草桿菌黑色變種（ATCC9372），切片含菌量為 5.0XI05 壹 5.0XI06cfu/片。其抵抗力應滿足以下條件：在溫度為 160±2℃ 時，其 D 值為 1.3-1.9min，存活時間≥3.9min，死亡時間≤1.9min。
（2）檢測方法：將枯草芽孢桿菌切片分別裝入滅菌試管中（1片/管）。滅菌器與每層櫃門把手對角線，外角處放置2支裝有菌片的試管，試管帽置於試管旁，關閉櫃門，經過壹個滅菌周期後，待溫度降至80℃時，加試管帽再取下試管。在無菌條件下，加入普通營養肉湯培養基（5ml/管），37℃培養 48h，觀察初步結果，繼續培養無菌生長管至第七天。
（3）結果判定：若每壹指示菌片接種肉湯管均澄清，判為滅菌，若其中壹指示菌片接種肉湯管渾濁，判為不合格，難以判定時，取0.1 ml接種在營養瓊脂平板上，塗上滅菌的L棒，放37℃培養48h，觀察菌落形態，並做塗片染色鏡檢，判斷是否有指示菌生長；若有指示菌生長，則在無菌生長管中繼續培養至第七天。生長；若有指示菌生長，判為滅菌不合格；若無指示菌生長，判為滅菌合格。
（4）註意事項：試驗所用指示菌片劑應經衛生部批準，並在有效期內使用。
20.3 紫外線消毒效果監測
20.3.1 紫外線燈輻照度值的測定
1）檢測方法：開啟紫外線燈 5min，將測定波長為 254nm 的紫外線照射儀探頭置於被檢紫外線燈下垂直距離 1m 的中央部位，待儀器穩定後，所顯示的數據即為紫外線燈的輻照度值。燈管的輻照度值。
（2）結果：普通30W直管型紫外燈，新燈輻照度≥90Uw/cm2為合格；使用紫外燈輻照度≥70Uw/cm2為合格；30W高強度紫外燈輻照度≥180Uw/cm2行為新合格。
（3）註：測定電壓220v接地5v，溫度20壹25℃，相對濕度<60%，紫外線輻照儀必須在計量檢定部門檢定有效期內使用。
20.3.2生物監測方法
（1）空氣消毒效果監測：監測按20.7執行。
（1）表面消毒效果監測：按20.6實施監測。
20.4醫療器械滅菌效果監測
20.4.1采樣時間：滅菌處理後，在有效期內保存樣品。
20.4.2常規監測
（1）檢測方法：無菌操作下取擬檢查的縫合針、留置針、手術刀片等小型醫療器械各5支，分別投人5ml無菌洗脫液中；註射器取5對，分別抽取5ml無菌肉湯5次；手術鉗、鑷子等大型醫療器械在無菌操作下取2份以上，用棉簽沾無菌洗脫液。反復擦拭沾有無菌洗脫液的棉簽取樣，將棉簽放入 5 毫升無菌洗脫液中。取樣管用力振蕩80次，用無菌吸管吸取lml待檢樣品於滅菌培養皿中，加人已融化的45℃-48℃營養瓊脂15-18ml，邊倒邊振蕩，待瓊脂凝固後，置於37℃培養箱中培養48h，計數菌落數。
（2）結果判定：平板上無細菌生長即為滅菌。
（3）註意事項：如消毒因子為化學消毒劑，取樣液中應加入相應的中和劑。
20.4.3 無菌試驗
20.4.3.1 無菌試驗準備
20.4.3.2 無菌操作：取縫合針、留置針、刀片等小件醫療器械 5 件，直接浸泡在 6 管需厭氧培養管（其中 1 管作為陽性對照）和 4 管黴菌培養管的 C 培養基中，用量為 15ml/管。
取5副註射器，在5ml洗脫液中反復抽吸5次，洗下管內菌種，混勻後接種於需氧培養管（***6管，其中1管作為陽性對照）和黴菌培養管（***4管）。接種量：0.5ml 用於 lml 註射器，Iml 用於 2ml 註射器，2ml 用於 5-10ml 註射器，5ml 用於 20-50ml 註射器，培養基用量：接種量不超過 2 毫升時為 15 毫升/管，接種量為 5 毫升時為 40 毫升/管。
用手術鉗、鑷子等大型醫療器械取2片棉簽沾無菌洗脫液反復塗抹取樣，將棉簽投人sml無菌洗脫液中，將取樣液混合後，接種於需要厭氧培養的試管（***6管，其中1管為陽性對照）和黴菌培養基（***4管）中。接種量為 lml/管，培養基量為 15ml/管。
20.4.3.3培養：在待檢樣品需厭氧培養管中，接種預先配制好的金黃色葡萄球菌陽性對照管液1．1000 稀釋 1 毫升，將需要厭氧培養的試管以及陽性對照管和陰性對照管分別在 30-35 ℃培養 5 天，將黴菌培養的試管和陰性對照管分別在 20-25 ℃培養 7 天，培養期間逐日檢查有無細菌生長，若加入供菌，則培養基為 15 毫升/管。有細菌生長時，如加入供試物後培養基出現渾濁或沈澱，培養後不能從外觀判斷時，可取培養液轉移到另壹相同培養基或斜面培養基上，培養 48-72h 後，觀察渾濁是否再現或在外側長出菌落，同時在培養液中轉移少量培養液，塗片染色，並用顯微鏡觀察有無細菌生長。
20．4 結果判定：陽性對照應在 24h 內有細菌生長，陰性對照應在培養期內無細菌生長，如需要厭氧和分枝桿菌培養的試管均澄清或較渾濁，但證明無細菌生長時，判定為已滅菌；如需要厭氧和分枝桿菌培養的試管，其中任何壹支出現渾濁並證實有細菌生長時，應重新取樣，分別用同樣方法復檢。2次，除陽性對照外，其它試管均不得有細菌生長，否則判為滅菌不合格。
20.4.4註意事項
（1）送樣時間不得超過6h，如樣品在0-4℃保存，不得超過24h。
（2）取樣樣品表面積<100cm2取整個表面；取樣樣品表面積≥100Cm2，取100cm2。
（3）若消毒因子為兒科消毒劑時，采樣液中應加入相應的中和劑。
20.4.5熱原檢查法：
20.4.5.鱟試驗
20.4.5.2 動物試驗法
（1）原理：壹定劑量的受試物品，在規定的時間內，觀察家兔體溫的升高，以判定受試物品所含熱原的限量是否符合規定。
（2）家兔：用於試驗的家兔應健康無傷，體重 1.7-3.0 千克，雌兔應未懷孕。兔子應在預測體溫前 7 天開始飼餵相同的飼料。在此期間，兔子的體重不應下降，精神、食欲和排泄物也不應出現異常。未用於熱原檢查的兔子，或供試品被判定符合要求，但組內溫升達到 06T；或供試品被判定不符合要求，但組內平均溫升未達到 0.8℃，且已靜養兩周以上；或三周未使用的兔子，應在供試品檢查前 3-7 天進行體溫預測和挑選。選擇試驗的條件與檢查供試品的條件相同；只有未註射藥液的兔子，且每隔 lh 測體溫壹次，***測體溫 4 次，4 次體溫均在 38.0-39.6℃ 範圍內，且最高體溫與最低體溫之差不超過 0.4℃，才可用於熱原檢查。用於熱原檢查的兔子如被判定為符合規定，則須休息至少 2 天，才可用於第二 次檢查。用於熱原檢查的家兔，如判定受試品不符合規定，且該組家兔平均溫升在0.8℃以上，則該組所有家兔不再使用，每只家兔用於普藥檢查的次數不得超過10次。
（3）試驗前準備：熱原試驗前l-2天，供試兔應盡可能處於同壹溫度的環境中，實驗室與飼養室溫差不得大於5℃，實驗室溫度應在17-28℃，在試驗過程中，應註意室溫變化不得大於3℃，應避免兔噪聲幹擾。c 兔應使用精度為±0.1℃的肛溫計或其他同樣精確的測溫裝置。所有家兔的肛門溫度計插入肛門的深度和時間應相同，深度約 6cm，時間不少於 Imin，每 30-60min 測溫壹次，壹般測量兩次，兩次溫度差不超過 0.2℃，取兩次溫度的平均值作為家兔的正常體溫。同壹天用兔的正常體溫應在 38.0-39.6℃ 範圍內，兔間正常體溫差不超過 l℃。
（4）供試註射器、針頭及所有與供試液接觸的用具，均應置於250℃的烘箱中加熱30min或180℃加熱2h，也可用其他合適的方法去除熱原。
（5）檢查法：取適用兔3只，測定其正常體溫後15min，從耳靜脈緩慢註入規定劑量並加溫至38℃左右的試液，然後每隔lh按前法測其體溫1次，***測3次，以3次中的最高溫度減去正常溫度，即為該兔體溫升高度數。若3只兔中有1只兔體溫升高0.6℃或超過0.6℃，或3只兔體溫升高均低於0.6℃，但體溫升高總數達l.4℃或超過l.4℃，應抽5只兔復測，檢查方法同上。
（6）判定結果：在初試的三只家兔溫升均小於0.6℃，且三只家兔溫升總數小於1.4℃，或在復試的五只家兔中，有幾只家兔溫升為0.6 ℃或 0.6 ℃或以上的只有壹只，而初試、復試的合計八只兔子的溫升總數為 3.5 ℃或 3.5 ℃或以下的，則認為是符合試驗要求的產品。則認為測試材料符合熱原測試的規定。
如初試的 3 只家兔中有 1 只以上或復試的 5 只家兔中有 1 只以上體溫升高 0.6℃或 0.6℃以上，或初試或復試的家兔體溫升高總數超過 3.5℃，則認為受試品不符合熱原試驗的規定。
20.5 手和皮膚黏膜消毒效果監測
20.5.1 采樣時間；消毒後立即采樣。
20.5.2 采樣方法
（1）手采樣：將受檢者的五指並攏，用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉簽在雙手指根屈面至指端來回搓動 2 次（壹只手塗搓面積約 30cm2），然後旋轉采樣棉簽，切斷操作者手的接觸面積，將棉簽投人 10ml 含相應中和劑的無菌洗脫液中。將棉簽投入 10ml 含有相應中和劑的無菌洗脫液試管中，立即送檢。
（2）皮膚和粘膜取樣：5cm×5crn滅菌平板，置於待檢皮膚上；用不含相應中和劑的無菌洗脫液棉簽1支，在規範平板上橫向、縱向來回均勻塗布5次，然後旋轉棉簽，切斷手接觸部位，將棉簽投入10ml含相應中和劑的無菌洗脫液試管中，立即送檢。不規則的粘膜皮膚可用棉簽直接摩擦取樣。
20．3 檢測方法
（1）細菌總數檢測：將取樣管用力振蕩80次，用無菌吸管吸取待檢樣品1.0ml接種於滅菌培養皿中，用融化的45-48℃營養瓊脂15-18ml，邊倒邊搖，待瓊脂凝固後，置於37℃培養箱中培養48h，計數菌落數。
采樣結果計算：
細菌總數（cfu/cm2）=平板上菌落數×稀釋倍數/采樣面積（cm2）
（2）病原菌檢測：病原菌檢測按 2015 年原則進行。
20.5.4結果判定
（1）消毒洗手
l、ll、llll類區域人員：菌落總數≤5Cfu/Cm2，且未檢出致病菌為消毒合格。
lll類區域工作人員：細菌總數≤10Cfu/Cm2，且未檢出致病菌為消毒合格。
lV類區域工作人員：細菌總數≤15 Cfu/Cm2，未檢出致病菌視為消毒合格。
母嬰室＼嬰兒室、新生兒室、兒科病房工作人員手部不得檢出沙門氏菌等致病菌。
（2）皮膚、粘膜：參照手的衛生標準。
20.5.5註意事項
皮膚黏膜采樣時，如表面小於5cm×5cm可采用相應面積的規格板采樣。
20.6物體及環境表面消毒效果監測
20.6.1采樣時間：消毒後采樣。
20.6.2 采樣方法：5cm×5cm滅菌規格板，置於待檢物體表面，取樣面積≥100cm2，連續取樣4次，用棉簽蘸取含相應中和劑的無菌洗脫液1支；在規格板上水平和垂直方向來回均勻擦拭各5次後旋轉棉簽，切斷手接觸區域，將棉簽投人10ml含相應中和劑的無菌洗脫液中。切斷手部接觸區後，將棉簽投入 10 毫升裝有相應中和劑的無菌洗脫液試管中，並立即送檢。
用棉簽直接擦拭門把手和其他不規則表面取樣。
20.6.3 檢測方法
(1) 細菌總數檢測：檢測方法按 20.5.3 (1) 執行。計算小物體表面的結果，以 cfu/件表示。
（2）致病菌檢驗：檢驗方法按 20.14 執行。
20.6.4結果判定
l、ll型區：細菌總數≤5cfu/Cm2，未檢出致病菌為消毒合格。
III類區域：細菌總數≤10cfu/Cm2，未檢出致病菌為消毒合格。
LV型區域：細菌總數≤15 cfu/Cm2，消毒未檢出致病菌為合格。
母嬰室、早產兒室、嬰兒室、新生兒室、兒科病房物品表面不得檢出沙門氏菌。
20.6.5註意事項
（1）分娩時間：按20.4.4（1）執行。
（2）采樣區域：根據 20.4.4（2）。
20.7空氣消毒效果監測
20.7.1采樣時間：消毒處理後、運行前采樣。
20.7.2采樣方法
（1）布點法；室內面積≤30Cm2時，設內、中、外對角線3點，布點部位的內、外點距墻面IM；室內面積>30M2時，設4角和中心5點，布點部位的4角距墻面lm。
（2）平板暴露法：將普通營養瓊脂平板（直徑9CM）置於室內采樣點，采樣高度距地面1.5m，采樣時將平板蓋打開，扣在平板旁，暴露5min，蓋上蓋子立即送檢。
20.7.3 檢測方法：將平板送入 37℃培養箱培養 48h，計數菌落數，分離致病菌。