I.儀器和設備
Pharmacia C 柱（1.6×100 厘米）、鐵架、鐵夾和水平儀；餾分收集器（需要準備約 100 支幹凈的試管）；濃縮離心機（低速 5,000 轉/分）；Centriprep-30（Amicon 4322），濃縮離心管。濃縮離心機（低速 5000 rpm）；Centriprep-30（Amicon 4322）濃縮離心管，請註意使用。
二、藥品和試劑
膠體 Sephacryl S-300 （Pharmacia）：a. 用緩沖液 A-150 預先平衡，使膠體體積完全沈降後，占整個體積的 70%～80%；用來預測膠體量。膠體的溫度應與操作處的溫度壹致，否則溫度變化會產生氣泡。c. Sephacryl 系列膠體具有相當大的吸附性，因此要在緩沖液中加入 0.15 M 以上的 NaCl 以去除非特異性吸附。0.4 mL。含甲狀腺球蛋白（670 kD）、牛γ球蛋白（158 kD）、雞卵清蛋白（44 kD）、馬肌紅蛋白（17 kD）、維生素 B12（1350）。
三、上柱
1.用純凈水沖洗玻璃柱（用純凈水上下沖洗即可，嚴禁使用管刷）；請了解柱子的結構和拆卸方法，垂直架起柱子，將部分收集器與軟管連接，用緩沖液A-150試試管路是否通暢；可以用止血鉗或長尾回形針夾住出口軟管，這樣可以控制溶出過程。用止血鉗或長尾回形針夾住出口軟管可控制溶解。註意系統應適當放置，不要將裝置安裝在交通要道上。
2.根據估計體積取出 Sephacryl 膠體，並註意膠體與緩沖液的溫度是否平衡；在小瓶中上下搖動膠體，使其完全懸浮，但不要產生過多氣泡。
3.向色譜柱中加入約 10 厘米的緩沖液，然後將膠體沿管壁緩緩倒入色譜柱中，直至到達色譜柱頂部，開始流動沖洗後膠體迅速下沈。
4.待膠體完全沈澱後，小心地向柱中註入緩沖液 A-150，關閉出水口，安裝上端蓋並連接緩沖瓶，打開出水口進行重力流洗。調節緩沖液瓶的高度，使流速約為每五至六秒壹滴，並將收集量設為 2.5 mL/管。
5.用大約 100 毫升膠體沖洗色譜柱後，關閉出口，取下上端蓋，用滴管將膠體上方的溶液抽出到大約 1 厘米的高度，註意不要破壞膠體表面的液面；然後打開出口，讓液面下降到膠體表面，再次關閉出口。然後關閉出口，準備註入樣品。
四、樣品色譜
1.用移液管或滴管吸取樣品（樣品量不宜超過膠體總體積的 3%），沿膠體上方的管壁緩慢加入，註意不要破壞膠體的平面。
2.打開出口，部分打開收集器；當樣品完全浸沒在膠體中時，關閉出口，慢慢加入等體積的緩沖液 A-150，打開出口，等待其慢慢進入膠體，重復此過程兩次。膠體表面不能受到幹擾，造成凹陷。
3.暫時關閉出液口，將液面高度填至柱頂，並鎖上上端蓋；然後打開出液口開始溶解，調節緩沖液瓶的高度，使流速為 6 秒壹滴。
4.留意前幾次的分裝情況，確保整個系統運行良好，註意收集器最容易出問題的部分。預計色譜柱要流洗壹夜，收集約 80 支試管。
10) 收集試管進行蛋白質定量和 GUS 活性測定，並繪制圖表。
5.收集 GUS 活性區，用 Centriprep-30 濃縮至 10 mL，用緩沖液 A-0 稀釋至 20 mL，保留 100 μL。
6.再用緩沖液 A-150 流洗色譜柱 100 mL，然後小心放置，以便稍後測定分子量。
V.分子量測定
1.分子量測定前壹天，請用緩沖液 A-150 沖洗色譜柱 100 mL，檢查色譜柱是否有氣泡，如有嚴重氣泡或幹裂，必須重新裝柱。
2.取 0.4 mL 標準分子量溶液和 0.5 mL 純目標酶（親和層析的 AF 部分），按上述方法註入色譜柱，然後立即開始膠體過濾，收集餾分。按照上述所有說明使用色譜柱和檢測收集器。
3.收集結果並進行蛋白質定量分析。可以確定幾個蛋白質峰，作為分子量的依據；此外，還可以通過目測確定有紅色峰的試管數量，從而確定其中解離出維生素 B12 的試管數量。利用上述數據，可以得出分子量與溶出管數的線性關系，作為分子量測定的標準校正線。
4.請對同壹批次的產品進行酶活性分析（GUS），然後測定酶的解離量，並與上述標準校正線比較，計算出酶的分子量。
6.移除色譜柱，保留膠體
1.如果色譜柱長期不用，應將膠體從色譜柱中取出，用緩沖液洗凈後保存在冷凍室中，但千萬不要放在冷藏室中。如果膠體擠得太緊，有時可能不容易取出，所以要耐心地用緩沖液慢慢沖洗。
2.膠體中可加入 0.01%NaN3 以防止黴菌生長，但切記使用前要洗掉；再次使用時，請檢查膠體中是否有灰黑色的黴菌顆粒，如果有不易打碎的團塊，請不要使用。