原理？DNA分子中的脫氧核糖基在酸性溶液中變成ω-羥基-γ-酮戊醛，與二苯胺試劑反應生成藍色化合物(λmax=595)。當DNA濃度為20 ~ 200μ g/ml時，吸光度與DNA濃度成正比，可用比色法測定。向反應溶液中加入少量乙醛可以提高反應靈敏度。除了DNA，脫氧木糖和阿拉伯糖也有同樣的反應。大多數其他糖，包括核糖，壹般沒有這種反應。操作步驟？標準曲線的繪制按下表加入各種試劑，混勻，置於60℃恒溫水浴中45分鐘，冷卻後，在波長595nm處進行比色測定，以DNA濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制標準曲線。管號試劑012345標準DNA溶液/ml 0 . 00 . 40 . 81 . 62 . 0蒸餾水/ml 2 . 01 . 61 . 20 . 80 . 40二苯胺試劑/ML4.04 .然後準確加入4.0ml二苯胺試劑，混勻，在60℃恒溫水浴中保溫45分鐘，後DNA含量的計算根據測得的吸光值，從標準曲線中找出吸光值對應的DNA含量，按下式計算樣品中的DNA含量。W= m1/m2×100%其中W:W:DNA的質量分數(%)；M1:試樣溶液中測得的DNA質量(μg)；M2:試樣溶液中所含試樣的質量(μg)；試劑和設備？壹、試劑？1.DNA標準溶液(200μg/ml):小牛胸腺DNA鈉鹽用0.01mol/L氫氧化鈉溶液配成200μg/ml溶液。2.DNA樣品溶液:準確稱取幹燥的DNA產物，用0.01mol/L氫氧化鈉溶液配制成約100μg/ml的溶液。3.二苯胺試劑:稱取純二苯胺(如不純，需在70%乙醇中重結晶兩次)1g溶於100ml分析純冰醋酸中，再加入10ml高氯酸(A.R .，60%以上)，混勻備用。當所用藥物純凈時，配制的試劑應無色。使用前加入1ml1.6%乙醛溶液(乙醛溶液應存放在冰箱內，壹周內可使用)，存放在棕色瓶中。0.01摩爾/升氫氧化鈉溶液5。冰醋酸。6.高氯酸。7.1.6%乙醛溶液。二、裝備？1.繪圖紙。2.吸管為0.20ml、0.50ml和1.0ml。試管1.5cm×15cm。4.722型分光光度計。5.恒溫水浴標準曲線見/s/blog _ 4d 30 c 8d 01009 GC 7 . html。
上一篇:電子商務好嗎？發展前景如何？下一篇:大藥丸怎麽吃？避孕藥後可以吃水果。