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進行植物組織培養壹般要經歷哪幾個階段?

進行植物組織培養壹般要經歷哪幾個階段?

壹個完整的植物組織培養過程壹般包括以下幾個步驟:

(1)準備階段

查閱相關文獻,根據已成功培養的相近植物資料,結合實際制訂出切實可行的培養方案。然後根據實驗方案配制適當的化學消毒劑以及不同培養階段所需的培養基,並經高壓滅菌或過濾除菌後備用。

(2)外植體選擇與消毒

選擇合適的部位作為外植體,采回後經過適當的預處理,然後進行消毒處理。將消毒後的外植體在無菌條件下切割成壹定大小的小塊,或剝離出莖尖,挑出花藥,接種到初代培養基上。

(3)初代培養

接種後的材料置於培養室或光照培養箱中培養,促使外植體中已分化的細胞脫分化形成愈傷組織,或頂芽、腋芽直接萌發形成芽。然後將愈傷組織轉移到分化培養基分化成不同的器官原基或形成胚狀體,最後發育形成再生植株。

(4)繼代培養

分化形成的芽、原球莖數量有限,采用適當的繼代培養基經多次切割轉接。當芽苗繁殖到壹定數量後,再將壹部分用於壯苗生根,另壹部分儲存或繼續擴繁。進行脫毒苗培養的需提前進行病毒檢測。

(5)生根培養

剛形成的芽苗往往比較弱小,多數無根,此時可降低細胞分裂素濃度或不加,提高生長素濃度,促進小苗生根,提高其健壯度。

(6)煉苗移栽

選擇生長健壯的生根苗進行室外煉苗,待苗適應外部環境後,再移栽到疏松透氣的基質中,註意保溫、保溼、遮蔭,防止病蟲危害。當組培苗完全成活並生長壹定大小後,即可移向大田用於生產。

如:莖尖→表面消毒→接種誘導培養基→莖尖生長→病毒檢測鑒定→培養無根小植株→培養生根→完整小植株→煉苗20-25天→移栽成活。

對不同的品種詞流程會略有差異,如進行果樹育苗還需進行嫁接等操作流程,但對組培工廠化育苗而言,壹般可根據上面的流程圖來安排各項作業,只有相互銜接好、配合好,才能提高生產效益。

植物組織培養過程中,植物細胞要經歷兩個重要階段是什麽

依據原理:細胞的全能性。

離體的植物器官、組織或細胞,在培養了壹段時間後,會通過細胞分裂,形成愈傷組織。由高度分化的植物器官、組織或細胞產生愈傷組織的過程,稱為植物細胞的脫分化,或者叫做去分化。脫分化產生的愈傷組織繼續進行培養,又可以重新分化成根或芽等器官,這個過程叫做再分化。再分化形成的試管苗,移栽到地裏,可以發育成完整的植物體。

植物組織培養壹般的的流程

植物組織培養實驗基本步驟

壹、母液的配置

1、MS大量元素母液的配制

壹般將大量元素配制成10倍的母液,使用時再稀釋10倍。按照配方表中用量依次分別稱取擴大10倍的:NH4NO3 、KNO3 ,KH2PO4 、MgSO4.7H2O 、CaCl2.2H2O的量,所有藥品稱取完畢後用蒸餾水逐個溶解,待全部溶解後,最後定容至1000ml,轉入1000ml細口試劑瓶中,貼上標簽,註明母液名稱、放大倍數、配制日期、配制人姓名,置於4℃冰箱中儲存備用。

2、MS微量元素母液的配制

壹般將微量元素配制成100倍的母液,使用時再稀釋100倍。按照配方表中用量分別依次稱取:MnSO4 ?4H2O、ZnSO4?7H2O 、H2BO3 、NaMoO4?2H2O、 CuSO4?5H2O、 CoCl2?6H2O擴大100倍的量,用蒸餾水逐個溶解,待全部溶解後,用容量瓶定容至1000ml,轉入1000ml細口試劑瓶中,貼上標簽,註明母液名稱、放大倍數、配制日期、配制人姓名,置於4℃冰箱中儲存備用。

3、MS鐵鹽母液配制

壹般將鐵鹽配制成100倍的母液,使用時再稀釋100倍。按照配方表中用量分別稱取擴大100倍的:FeSO4?7H2O和Na2?EDTA?2H2O的量,把FeSO4?7H2O和 Na2?EDTA?2H2O分別置於200ml蒸餾水中,加熱並不斷攪拌使之溶解(磁力攪拌器,邊加熱,邊攪拌)。保持加熱,把FeSO4溶液慢慢倒入Na2?EDTA溶液中並不斷攪拌,接近沸騰時停止加熱,待溶液冷卻後加蒸餾水到最終容積1000ml,置於棕色細口瓶中,用力振蕩1~2min,貼上標簽,註明母液名稱、放大倍數、配制日期、配制人姓名。在室溫下避光儲存壹段時間令其充分反應後,再置於4℃冰箱中儲存備用。

4、MS有機化合物母液的配制

壹般將有機化合物配制成100倍的母液,使用時再稀釋100倍。按照配方表中用量分別稱取擴大100倍的:肌醇、維生素B1、煙酸、甘氨酸、維生素B6的量,用蒸餾水依次溶解並定容至500ml後,轉入500ml細口試劑瓶中,貼上標簽,註明母液名稱、配制日期、配制人姓名,置於4℃冰箱中儲存備用。

二、植物激素的配置

常見激素:二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)、吲哚-3-丁酸(IBA)、激動素(6-糠氨基嘌呤、 KT)、6-芐氨基嘌呤(6-BA)、赤黴素(GA3)、

1、生長素類:

(1)、生長素類在組織培養中的主要作用是:誘導細胞的分裂和根的分化,誘導愈傷組織

(2)、常見生長素:二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)、吲哚-3-丁酸(IBA)。NAA、IAA、IBA被廣泛用於生根,2,4-D有利於愈傷組織的誘導和生長。IAA容易光解,註意用棕色試劑瓶儲存,儲存時間不要太久。

(3)、溶解方法:用少量1mol/L NaOH或95%酒精預溶解,再加蒸餾水定容,以前者為好。

(4)、儲存:配成壹定濃度後,冰箱冷藏儲存

2、細胞分裂素

組織培養中,細胞分類素主要促進細胞分裂和由愈傷組織上或器官上分化不定芽。細胞分裂素常常與生長素相互配合,用以調節細胞分裂,細胞伸長,細胞分化和器官形成。

(1)、常用的細胞分裂素有: 6-芐氨基嘌呤(6-BA)、激動素(6-糠氨基嘌呤、 KT)、玉米素(ZT)、噻二唑苯基脲( thidiazuron、 TDZ )

(2)、溶解方法:用少量(1ml)1mol/L HCL預溶解,再加蒸餾水定容。

(3)、儲存:配成壹定濃度後,冰箱冷藏儲存

3、赤黴素(GA3)

(1)、溶解方法:用少量95%酒精預溶解,再加蒸餾水定容。

(2)、儲存:配成壹定濃度後,冰箱冷藏儲存

(3)、赤黴素易溶於水,但溶於水後不穩定,容易分解

(4)、滅菌:高溫易分解,要過濾滅菌

4、脫落酸

(1)、溶解:易溶於NaHCO3溶液、氯仿或丙酮。

(2)、儲存:具有熱穩定性,但容易發生光解。配成壹定濃度後,冰箱冷藏儲存

三、培養基的制備與滅菌

(壹)、培養基的制備

1、將所需的各種母液和植物激素按順序放好,將潔凈的各種玻璃器皿等放在指定位置。

2、取燒杯壹個內盛200ml蒸餾水,按照培養基配方所需量依次取母液和植物激素加入燒杯,攪拌,按相應培養基稱量蔗糖和瓊脂,並新增到燒杯中,在電爐上加熱待瓊脂完全融化後加蒸餾水定容至所需體積。

3、充分混合後,用1mol/LNaOH和1mol/LHCl調節培養基的pH為培養基要求pH值。

4、趁熱把培養基分裝到廣口瓶中。封好瓶口。待滅菌。

(二)、培養基的滅菌

滅菌溫度及滅菌時間:121℃(1.06kg/cm2)下滅菌20分鐘。(如是實驗所用菌材滅菌,如無菌水及器械,則是121℃(1.06kg/cm2)下滅菌30分鐘)

1、檢查滅菌鍋外層鍋內水位,水量過少時應加水。把分裝好的培養基放入滅菌鍋的消毒桶內。

2、蓋上鍋蓋,註意按照說明操作並確定已蓋好,設定好溫度和時間引數,開啟電源加熱滅菌。

3、滅菌時間到後,先切斷電源,讓滅菌鍋內溫度自然下降,待滅菌鍋壓力表指標降到0時,開啟排氣閥,旋松螺栓,開啟鍋蓋,取出已滅菌的培養基。

4、剛滅過菌的培養基成液體狀,取出時不要用力搖動,否則會導致部分培養基沾附在瓶壁。放置在水平桌面上自然冷卻。在室溫下放置1-2天,觀察有無微生物生長,以確定培養基是否徹底滅菌。經檢查沒有雜菌生長的方可使用。

四、無菌操作技術和接種

1、接種前,用75%酒精棉球擦拭超凈工作臺臺面,將培養基及接種用具放入超凈工作臺臺面,開啟超凈工作臺紫外燈及接種房間紫外燈,照射約30min,然後關閉紫外燈。開啟房間換氣扇及微開超凈工作臺的玻璃擋板,通風20min後,即可進行無菌操作。(此步由專人統壹負責)

2、接種室滅菌過程中同時對外植體進行表面滅菌。先將接種材料在流動的自來水下涮洗幹凈,吸幹水份後切成大約70mm長的片段放進500ml燒杯中,用蒸餾水沖洗2次,倒掉蒸餾水後倒入0.1%的升汞水消毒,將材料淹沒浸泡約10分鐘(期間用鑷子攪拌幾次)。

3、把在消毒液中的接種材料轉移到超凈工作臺上。用無菌鑷子將已完成滅菌的接種材料轉移到燒杯中,用無菌水清洗3次,每次不少於1分鐘,洗時不斷搖動燒杯以確保完全除去消毒液。

最後壹次清洗後轉移到無菌托碟上,將接種材料切成壹定大小(花托0.5cm2、莖段0.5-1cm)。

4、取下培養瓶的蓋子用火燒灼瓶口。用鑷子將外植體輕輕插入到瓊脂上,立即蓋上蓋子。

5、操作完後將鑷子等器械浸入75%酒精中。操作器械需要在每次使用前消毒壹次。方法是將浸於酒精中的器械取出後置於酒精燈火焰上充分灼燒,待冷卻後方可使用。

6、將培養瓶放到培養箱裏,在要求溫度下培養,觀察記錄。

植物組織培養壹定要經過愈傷組途徑嗎

植物組織培養壹定要經愈傷組織途徑嗎 植物的組織培養中,從壹塊外植體形成典型的愈傷組織,大致要經歷三個時期:啟動期、分裂期和形成期。

植物組織培養壹般需要使用含有植物激素培養液嗎

植物如果能夠自己提供激素的話,壹般是不需要人提供的,但是人提供的在壹定範圍內能幫助植物生長,超出範圍就會抑制植物的生長,所以要有壹個範圍,並且植物生長的壹些部位受到不同濃度的控制,使用激素要註意技術的濃度.

植物組織培養壹般用什麽樣的培養基?求解

無菌條件下,將從機體取得的組織塊或細胞置於體外的模擬體內各種條件下進行培養,培養條件包括適宜的營養液、O2、CO2、PH值、滲透壓與溫度等,還要防止微生物汙染。可在倒置相差顯微鏡下直接觀察生活級胞的運動、增殖、分化、吞噬等動態變化,並可用顯微攝相、顯微攝電影或顯微錄影等真實記錄下生活細胞連續變化的過程強。

該技術是壹種比較簡便、反應敏銳的實用方法,目前已建立多種細胞株,並已廣泛用於實驗研究。也可應用組織培養細胞研究各種物理、化學及生物因素對細胞的直接作用。組織培養術與上述各種技術密切配合,可獲得單純從體內實驗難以達到的效果。 

婚姻破裂壹般要經歷哪幾個階段?

婚姻感情的破裂通常都要經歷四個時期: 壹、矛盾期。 夫妻經過戀愛的熾熱期後,便進入矛盾期,若矛盾未能及時解決,便化成纏繞不清的爭執。壹般說,矛盾糾紛在低文化層次和膽汁質、多血質的當事者中多表現於外泄,如口角、毆鬥、毀物等。經斡旋,可解決,但過後又重演,內戰不息。在高文化層次和粘液質、抑郁質的當事者中多表現於內郁,即外表上不爭不吵,但內心彼此冷淡,心存罅隙,斡旋不易見效。 二、戒備期。 矛盾糾紛的積累,夫妻逐漸產生隔閡,從而相互戒備,俗稱"同床異夢"。有的從財產、收支上互相隱瞞,有的瞞著對方與異性來往等。為了防備對方抓住把柄和了解到事實真相,雙方在經濟、社交關系等方面相互戒備,甚至連個人的事業問題、前途問題等,也守口如瓶,層層設防像防盜壹樣地防備對方。 三、裂痕期。 隱秘總有泄露的壹天。隱秘的泄露造成更嚴重的糾紛,便加重隔閡與戒備,結果形成惡性回圈,終於出現感情裂痕。感情裂痕表現在情緒上是強烈的不滿,表現在行為上是相互的背離。這時,有居住條件的大多分居;無居住條件的,即使同居,也是背靠背,井水不犯河水。 四、破裂期。 裂痕越來越大,最後感情徹底破裂。來自 :99weiqing.

植物組織培養,從接種到商品苗可以分為五個階段,他們是

壹個完整的植物組織培養過程壹般包括以下幾個步驟:

(1)準備階段

查閱相關文獻,根據已成功培養的相近植物資料,結合實際制訂出切實可行的培養方案。然後根據實驗方案配制適當的化學消毒劑以及不同培養階段所需的培養基,並經高壓滅菌或過濾除菌後備用。

(2)外植體選擇與消毒

選擇合適的部位作為外植體,采回後經過適當的預處理,然後進行消毒處理。將消毒後的外植體在無菌條件下切割成壹定大小的小塊,或剝離出莖尖,挑出花藥,接種到初代培養基上。

(3)初代培養

接種後的材料置於培養室或光照培養箱中培養,促使外植體中已分化的細胞脫分化形成愈傷組織,或頂芽、腋芽直接萌發形成芽。然後將愈傷組織轉移到分化培養基分化成不同的器官原基或形成胚狀體,最後發育形成再生植株。

(4)繼代培養

分化形成的芽、原球莖數量有限,采用適當的繼代培養基經多次切割轉接。當芽苗繁殖到壹定數量後,再將壹部分用於壯苗生根,另壹部分儲存或繼續擴繁。進行脫毒苗培養的需提前進行病毒檢測。

(5)生根培養

剛形成的芽苗往往比較弱小,多數無根,此時可降低細胞分裂素濃度或不加,提高生長素濃度,促進小苗生根,提高其健壯度。

(6)煉苗移栽

選擇生長健壯的生根苗進行室外煉苗,待苗適應外部環境後,再移栽到疏松透氣的基質中,註意保溫、保溼、遮蔭,防止病蟲危害。當組培苗完全成活並生長壹定大小後,即可移向大田用於生產。

如:莖尖→表面消毒→接種誘導培養基→莖尖生長→病毒檢測鑒定→培養無根小植株→培養生根→完整小植株→煉苗20-25天→移栽成活

那些專業包含植物組織培養?

植物的組織培養是研究植物得壹個途徑,所以跟植物研究有關的專業都可能用上這個,最主要得就是園藝專業,農學專業其次還有資環專業都有用到組織培養。

生物選修3 植物組織培養要滅菌嗎?

培養基要滅菌,植物組織要消毒

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