硝酸還原酶活性的測定原理硝酸還原酶是植物氮代謝中的關鍵酶，簡單易與作物壹起吸收利用氮素，壹般條件下即可。紅色偶氮染料。反應液的高酸度增加了重氮化的速度，但降低了偶合的速度，顏色相對穩定。提高溫度可以提高反應速度，但會降低重氮鹽的穩定性，所以反應需要在相同的條件下進行。該方法靈敏度高，每毫升可測定0.5微克亞硝酸鈉。儀器醫藥721分光光度計真空泵(或註射器)培養箱天平真空幹燥器鉆孔器三角瓶移液管燒杯0.1mol/L磷酸鹽緩沖液，pH7.5(見表2)。0.2摩爾/升硝酸鉀:將20.22克硝酸鉀溶於1000毫升蒸餾水中。磺胺試劑:1g磺胺加25ml濃鹽酸，用蒸餾水稀釋至100ml。α-萘胺試劑:將0.2gα-萘胺溶於含有1ml濃鹽酸的蒸餾水中，並稀釋至100ml。亞硝酸鈉標準溶液:將1g亞硝酸鈉溶於蒸餾水中至1000ml。然後吸5ml，再加入蒸餾水稀釋至1000ml。此溶液每毫升含25微克Nano，應及時稀釋。操作步驟1..清洗新鮮的葉子(蓖麻、煙草、向日葵、油菜、小麥、棉花等。)用水，用吸水紙吸幹，然後用鉆頭鉆成直徑約1cm的圓片，用蒸餾水沖洗2遍，吸幹，然後在桌上天平上稱出兩片同樣重量的葉子，每片約兩份。分別放入盛有下列溶液的50毫升三角瓶中:(1)0.1摩爾/升磷酸緩沖溶液(ph 7.5)5毫升+蒸餾水5毫升；(2)0.1mol/L磷酸緩沖溶液(pH7.5)5ml+0.2mol/L KNO3 5ml。然後將三角燒瓶放入真空幹燥器中，連接真空泵抽空氣，放氣後圓盤會沈入溶液中(如果沒有真空泵，可以用20ml註射器代替，將反應液和葉盤壹起倒入註射器中，用手指堵住註射器的出口孔，然後用力拉動註射器抽真空，使圓盤中的空氣被抽走，沈入溶液中)。將三角瓶放入30℃培養箱中，保溫30分鐘，然後在取樣前註意葉片的光合作用壹段時間，積累碳水化合物。如果組織中的碳水化合物含量低，酶的活性就會降低。此時可在反應液中加入30μg 3-甘油醛磷酸酯或1，6-二磷酸果糖，可顯著提高溫度30分鐘。吸取1毫升反應液於試管中，加入2毫升磺胺試劑和2毫升α-萘胺試劑，混合搖勻，靜置30分鐘，用比色計進行比色測定。3.繪制標準曲線與重氮化和偶合的速度有關，溫度和酸濃度都影響顯色速度，也影響靈敏度。但如果標準品和樣品在相同的條件下測量，顯色速度是壹樣的。將1 ml不同濃度(如5、4、3、2、1、0.5 μ g/ml)的NaNO2溶液吸取到試管中，加入2ml磺胺試劑和2mlα-萘胺試劑，混合搖勻，靜置30分鐘(或在壹定溫度的水中靜置30分鐘)，立即用分光光度計測定。然後，以吸光度為縱坐標，以NaNO2的濃度為橫坐標。在平方毫米的紙上畫吸光度-濃度曲線。實驗1。試比較不同植物的酶活性。2.取樣前盡量比較植物在光照或黑暗條件下酶活性的差異。參考1。陳偉和張得壹:1980。植物組織中硝酸還原酶的提取、測定和純化，植物生理學通訊，1980 (4): 45-49。2.周樹和鄭相木:1985。硝酸還原酶體內分析方法的探討，植物生理學通訊，1985 (1): 47-49。3.哈格曼，R.H .和D.P。哈克比:1971。酶學方法，23A:491—503。4.Radin.J.W.:1973。植物生理學，51: 332—336.5。斯內爾，F.D .和C.T .斯內爾:1949。比色法分析，第二卷，802—807(張誌良，華東師範大學)參考文獻:
http://218 . 63 . 248 . 165/RESOURCE/CZ/CZSW/SWSY/ZWSLSY/3019 _ SR . HTM
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