(2)用無菌滴管將抗血清分裝於小管中，每管約65438±0毫升。
(3)可在-20℃以下保存2年以上。
(4)如有可能，可將血清冷凍幹燥，在4℃以下保存更長時間。
準備工作:
1，動物的選擇
羊、馬、雞、猴子和豚鼠是常用的免疫動物。在實驗中，要考慮抗原與動物物種的關系，抗原與動物物種的性質，對免疫血清的需求，對免疫血清的要求以及動物個體。用於免疫的動物要健康體壯，最好是雄性。最常用的實驗動物是兔子。壹般選用3只健康家兔，當年繁殖，6個月齡以上，體重2 ~ 3公斤。免疫前，用金屬號牌固定兔耳，或在動物背上塗抹染料，做明顯標記。
2.抗原的制備
1)抗原稀釋:用無菌生理鹽水將抗原稀釋至2mg/ml，免疫前壹天加入溶液，使每毫升抗原溶液含青黴素1000 UI，鏈黴素1000 UI，第二天取出，4℃過夜(壹般不加青黴素和鏈黴素)，與佐劑混合制成乳劑，用於動物免疫。
免疫原的註射劑量應考慮其抗原性、分子量、動物個體狀態和免疫時間。對於純可溶性抗原的免疫劑量，小鼠首劑抗原通常為50 ~ 100？G/次，大鼠100 ~ 200？G/時間，兔子是100？g ~ 1mg/次，合成免疫原2 mg(半抗原約20 ~ 200？g)，壹般需要與等量的弗氏完全佐劑混合。加強免疫的劑量為第壹劑的1/2，通常用不完全弗氏佐劑或不用佐劑。如果需要制備高特異性抗血清，可以選擇低劑量抗原短期免疫；另壹方面，為獲得高效價抗血清，應采用大劑量抗原的遠程免疫。
2)佐劑和抗原乳液的制備
1佐劑的制備:弗氏完全佐劑(弗氏？s完全佐劑)，每個實驗室的配方都不壹樣，我們實驗室用的配方如下:
醫用液體石蠟20毫升
羊毛脂12g
水浴溶解，混勻，裝入青黴素瓶中，用紗布和細繩紮緊軟木塞。8磅滅菌20分鐘，保存在4℃備用。免疫前制備抗原乳劑時，用活卡介苗(有時為死卡介苗)代替死結核桿菌，每毫升試劑中加入10mg活卡介苗，為弗氏完全佐劑。
2抗原乳液的制備:壹般有兩種方法。先將等量的完全佐劑(註意佐劑必須提前加熱融化，但不超過50℃)和抗原溶液分別吸入兩個5ml註射器中，在兩個註射器的針頭之間放入壹根長約8 ~ 12 cm的醫用無毒塑料管，用無菌生理鹽水沖洗後將兩個註射器連接在壹起(塑料管必須先用酒精浸泡消毒)， 用註射器針頭連接，塑料管和針頭的口徑要合適，要稍微緊壹點。 )將針頭插入塑料管約1 ~ 2 cm，兩人相對而坐後再慢慢推動針芯，使管內溶液進入塑料管，進入對面的註射器。每推壹次針芯，都要把管內的東西全部推出來，另壹邊也是這樣，讓管內的液體來回混合，直到形成油包水。
其次，也可以將等量的佐劑和抗原溶液倒入碗中，反復研磨，形成油包水型乳劑。這種方法的主要優點是快速可靠，缺點主要是粘附過度，浪費佐劑和抗原。
制備的乳劑是否形成油包水乳劑直接影響免疫效果。因此，有必要進行質量檢查。檢驗方法是將配制好的乳化液滴壹滴在冷水(自來水)表面，合格的乳化液滴入水面，保持液滴完整，不分散。不合格的乳化液進入水面後會立即擴散，水面的油汙會逐漸擴大。這必須繼續操作，直到質量合格。
但有時由於佐劑制劑的質量問題，很難乳化到合格。在這種情況下，有必要考慮重新制備佐劑。
3.免疫途徑、劑量和免疫周期
根據不同的抗原和試驗要求，可選擇不同的抗原註射方式進行免疫，如皮內、皮下、肌肉、靜脈或淋巴結註射。壹般經常用到背部和腳部。耳後等處皮內或皮下註射。第壹次免疫和第二次免疫的間隔通常為2 ~ 4周。常規免疫方案是皮下註射抗原和CFA進行基礎免疫；然後用免疫原和IFA進行2 ~ 5次加強免疫，每次間隔2 ~ 3周，采用皮下或腹腔註射加強免疫。
1)常規免疫(皮內多穴位註射):
1首次免疫:劑量為每只家兔註射1.0毫升抗原乳劑(含1 ~ 2毫克抗原)。註射部位為兩後足底各皮內註射0.2 ml，其余0.6 ml分多點皮內註射於脊柱兩側、頸部、腹股溝、腋窩淋巴結，12點每點可註射0.05ml。
第二次免疫:第壹次免疫後20天左右，劑量為1.0ml/只(1 ~ 2 mg/ml)，加弗氏不完全佐劑。註射部位為皮下註射，每點0.65438±0毫升。
第三次免疫:第二次免疫後兩周內，註射劑量和部位同第二次免疫。免疫後7 ~ 7 ~ 14d取少量靜脈血，分離血清，通過血液試驗測定效價。
2)淋巴結免疫:主要優點是可以減少劑量。流程如下:
1甲萘威疫苗的致敏:免疫前，於足底每側註射甲萘威活疫苗(75mg/ml)0.3ml。觀察兩側腘窩淋巴結約10天，壹般可腫大如蠶豆大小。此時可以在淋巴結進行免疫接種。
2.首次免疫:用手指定淋巴結後，向雙側腘窩淋巴結內註射抗原乳劑0.25ml，每只兔總量0.5ml；第壹次免疫後20天，腹部皮下註射不含佐劑的1mg/1ml抗原溶液，以增強免疫力。
兩周後，可以按照第壹次免疫的劑量和途徑再次註射。壹般可以在第三次免疫前檢測血液的效價。如果效價已經達到要求，就不需要進行第三次免疫了。
如果條件允許，免疫後應加強動物飼料管理，如飼餵煮熟的大豆。
3)腹部免疫:壹般不需要佐劑，適用於抗原性強的細胞或顆粒抗原，如用羊紅細胞免疫家兔或小鼠。
4、血液檢驗，抗體效價的測定
壹般可在第三次免疫後7 ~ 10天內，從小鼠的兔耳靜脈或尾尖取少量血液，分離血清後進行血檢。
①圓環試驗，經典方法，目前很少使用，如20？低於g/ml的抗原能在30分鐘內出現嗎？哎？沈澱環，即抗體效價在1: 5000以上時為合格。
②免疫雙擴散法，這是最常用的驗血方法。具體方法是在中間孔加入稀釋抗原(1mg/ml)10。l，孔周圍順時針加入制備的抗血清分別為1:2，1:4，1:8，1:16，1:32，1:64。37℃保溫24小時後，效價在1:16以上，可判定出血。
5.出血的
滴定度檢查合格後才能進行放血。放血前動物應停止進食12 h，以降低血清中的脂肪含量。如果想保留免疫動物，可以直接從心臟取血，或者切開耳靜脈滴血或者穿刺心臟取血。抽血後，將等量的5%葡萄液緩慢註入靜脈，以彌補失血。經過2 ~ 3個月的休息，抽血的動物可以再次加強免疫力後再抽血。如果打算壹次性失血致死，可以采用頸動脈放血的方法，各種采血方法如下。
1)心臟采血:將動物固定在仰臥位，用食指找出心臟動量高的部位(胸骨左側，自下而上第三、四根骨之間，指兔子)，剪去少許毛發，用2.5%碘酒和75%酒精消毒，用9#針在預定位置與胸部打45%。將喇叭刺入心臟，輕微上下移動針頭，當血液進入註射器時，固定註射器位置取血。體重2.5公斤的兔子，壹次可抽血20 ~ 30毫升。
2)耳靜脈滴血:先剪去耳靜脈附近的毛發，用無菌棉球擦拭皮膚(不要用酒精消毒，以免溶血)。用臺燈照射耳朵，使血管因溫度升高而擴張，然後用無菌刀片將耳緣靜脈切成長0.5cm的縱向切口，第壹次切口應從耳尖開始，再切時逐漸向耳根移動。使用無菌試管或試管收集流出的血液。如果切口凝固，血流不暢，可用無菌棉簽輕輕擦去切口外的血塊(註意不要過分損傷切口)，血流可繼續流出，直至達到所需血量。抽血後用無菌棉球壓迫切口止血。壹次從耳緣靜脈采血約需50毫升，動物不會死亡。
3)頸動脈放血:讓動物仰臥，固定四肢。頸部剪毛消毒後，前頸部皮膚長約10cm，用止血鉗分開夾住皮膚，剝離皮下組織露出肌肉層，再用手柄分開，即見到搏動的頸動脈。仔細解剖約5cm長的頸動脈和迷走神經，選擇血管中部，用止血鉗夾住血管壁周圍的筋膜。遠端用絲線結紮，近端用動脈鉗夾住，血管用酒精棉球消毒，用無菌剪刀剪開V形切跡。取壹根長2.5cm，直徑1.6mm的塑料管，壹端剪成針狀斜面，將此端插入頸動脈，另壹端放入200ml無菌三角瓶中，然後放開止血鉗，血液流入三角瓶中，動物失血而死。壹只2.5公斤的兔子可以出血80 ~ 100毫升。
6、血清的分離
它必須在無菌條件下進行。平皿或三角瓶中采集的血液凝固後，在無菌環境下(如潔凈工作臺)用無菌滴管將血塊從瓶壁上剝離，然後取出，37℃1 ~ 2h，再置於4℃過夜，使血清充分沈澱(不能冷凍，否則會引起溶血)。通過離心沈澱分離血清，並儲存在低溫冰箱中。使用前，必須簽字確認合格後，才能包裝保存備用。