熒光定量PCR原理：
隨著PCR反應的進行，PCR反應產物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經過壹個循環，收集壹個熒光強度信號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化，從而得到壹條熒光擴增曲線圖。
熒光定量PCR最早稱TaqMan PCR，後來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的壹種新的核酸定量技術。該技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現其定量功能的
壹般而言，熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產物量的變化。
而在平臺期，擴增產物已不再呈指數級的增加，PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系，根據最終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數。
只有在熒光信號指數擴增階段， PCR產物量的對數值與起始模板量之間存在線性關系，我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便，在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
熒光域值（threshold）
是在熒光擴增曲線上人為設定的壹個值，它可以設定在熒光信號指數擴增階段任意位置上，但壹般熒光域值的缺省設置是PCR反應前3-15個循環熒光信號標準偏差的10倍，即threshold。
Ct 值：是指每個反應管內的熒光信號到達設定域值時所經歷的循環數。
Ct值與起始模板的關系：
研究表明，每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數的對數存在線性關系，起始拷貝數越多，Ct值越小。
利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線，其中橫坐標代表起始拷貝數的對數，縱坐標代表Ct值如下圖所示。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。
熒光定量檢測
熒光定量檢測根據所使用的標記物不同可分為熒光探針和熒光染料。熒光探針又包括Beacon技術（分子信標技術，以美國人Tagyi為代表）、 TaqMan探針（以美國ABI公司為代表）和FRET技術（以羅氏公司為代表）等；
熒光染料包括飽和熒光染料和非飽和熒光染料，非飽和熒光染料的典型代表就是現在最常用的SYBR GreenⅠ；飽和熒光染料有EvaGreen、LC Green等。
嵌合熒光染料法（SYBR GreenⅠ）
SYBR Green I是熒光定量PCR最常用的DNA結合染料，與雙鏈DNA非特異性結合。在遊離狀態下，SYBR Green I發出微弱的熒光，但壹旦與雙鏈DNA結合，其熒光增加1000倍。所以，壹個反應發出的全部熒光信號與出線的雙鏈DNA量呈比列，且會隨擴增產物的增加而增加。