腰椎穿刺術的穿刺點壹般在兩髂後上極連線，在L3與L4或L4與L5之間的間隙進針。
2、針頭由淺入深依次要經過的結構：
穿刺針頭應依次通過皮膚、皮下組織、棘上韌帶、棘突間的棘間韌帶、黃韌帶、硬膜外隙（其中包括內椎靜脈叢、硬脊膜和蛛網膜），進入蛛網膜下腔，並位於馬尾神經根之間。