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緩沖液的作用

緩沖液的作用是能在加入少量酸或堿和水時,抵抗pH改變的溶液,維持溶液的pH值相對穩定。其解釋內容如下:

1、緩沖溶液指的是由弱酸及其鹽、弱堿及其鹽組成的混合溶液,能在壹定程度上抵消、減輕外加強酸或強堿對溶液酸堿度的影響,從而保持溶液的pH值相對穩定。在生物體中有三種主要的pH緩沖體系,它們是蛋白質、重碳酸鹽緩沖體系。

2、緩沖液在生物化學、分子生物學、制藥等領域也有廣泛的應用,常常用於維持實驗體系的酸堿度。這是因為研究工作的溶液體系pH值的變化往往直接影響到研究工作的成效。例如,“提取酶”實驗中,如果體系的pH值發生大幅度變動,酶活性就可能下降甚至完全喪失。

3、沖液通過其獨特的化學性質,起到了維持pH穩定、保護生物正常生理環境以及提高實驗效果等重要作用。當我們在生化研究工作中向某些實驗體系中加入少量酸或堿,或者進行稀釋時,如果使用了緩沖液,則它能有效地抵抗pH的改變,保持pH值的穩定。

使用緩沖液的註意事項

1、註意緩沖液的保存條件和期限。例如,MOPS緩沖液可以在2~8℃下保存至少6個月,並且應通過0.2μm濾膜進行過濾除菌。避免緩沖液長時間存放在定量加液器中,這是因為這種設備並不完全密閉,容易導致揮發性成分(如氨或醋酸)的流失。

2、許多緩沖溶液包含易揮發組分,如氨-氯化銨中的氨和醋酸鈉-醋酸中的醋酸。這意味著它們應適當配制,並在使用後立即密閉並存放在低溫環境中,以防止組分揮發導致溶液失效。當進行有核酸酶參與的實驗時,可考慮使用經過高壓滅菌處理且無核酸酶的MOPS溶液。

3、在使用緩沖液時,需要根據實驗要求選擇合適的緩沖液種類及其濃度。例如,HEPES緩沖液是壹種優良的生物學研究用緩沖液,其PH緩沖範圍為6.8-8.2,常用於細胞培養的緩沖體系。

4、緩沖液使用前必須過濾。溶劑、樣品易受到細菌和黴菌的影響,要註意清潔。壹般不能直接用有機溶劑做清洗沖洗。梯度洗脫時,選低吸收值的緩沖液。例如:梯度洗脫時,緩沖液與有機相應預混,以防止析鹽。在保證峰不拖尾的情況下,盡可能選用低濃度的緩沖鹽,防止析鹽。

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